[发明专利]检测苏丹红和对位红药物的酶联免疫试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种检测苏丹红和对位红药物的酶联免疫试剂盒，其特征在于它含有：

(1)包被有包被原的酶标板；

(2)酶标记物；

(3)苏丹红标准品溶液；

(4)底物显色液；

(5)终止液；

(6)浓缩洗涤液；

(7)浓缩复溶液，

所述包被原为苏丹红抗原、抗体或抗抗体，所述酶标记物为酶标记苏丹红抗原、酶标记苏丹红抗体或酶标记抗抗体，

当酶标板上包被抗原且酶标记物为酶标记抗抗体或酶标板上包被抗抗体且酶标记物为酶标记抗原时还含有苏丹红特异性抗体工作液。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述苏丹红抗原是由苏丹红半抗原与载体蛋白偶联得到，所述苏丹红抗体是由所述抗原制备获得。

3.如权利要求2所述的试剂盒，所述苏丹红抗原是通过下述步骤得到的：

1)取对二氨基联苯25mg，加入0.2mol/L盐酸4.5ml溶解，冰浴；

2)取亚硝酸钠10-20mg用0.5ml水溶解后加入(1)中，在冰上搅拌反应0.5-1小时，取一部分用于下步反应，其余分装-20℃保存；

3)取20-100mg载体蛋白用PH9.0，5ml硼酸缓冲液溶解，制备成BSA溶液；

4)取5-20mgβ-萘酚用PH9.0，5ml硼酸缓冲液溶解，制备成β-萘酚溶液；

5)将载体蛋白溶液和β-萘酚溶液混合后放在冰上，加入1-3ml重氮化的对二氨基联苯溶液，避光反应12-24h；

6)用PH7.4，0.01mol/L的磷酸盐缓冲液透析三天，每天换液3次，得到苏丹红抗原。

4.如权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于所述苏丹红抗体为单克隆抗体。

5.如权利要求2或3所述的试剂盒，其特征在于所述载体蛋白为牛血清蛋白、卵清蛋白、人血清白蛋白、甲状腺蛋白、血蓝蛋白。

6.如权利要求书1或2所述的试剂盒，其特征在于所述包被缓冲液为pH值为9.6，0.1mol/L碳酸盐缓冲液，所述封闭液为pH值为7.2～7.6，含有4～8％酪蛋白，5％奶粉，0.02～0.04mol/L的磷酸盐缓冲液。

7.如权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于所述酶标记物的标记酶为辣根过氧化物酶或细菌提取碱性磷酸酯酶，当标记酶为辣根过氧化物酶时，底物显色液A液为过氧化氢或过氧化脲，底物显色液B液为邻苯二胺或四甲基联苯胺，终止液为1～2mol/L的硫酸或盐酸缓冲液；当标记酶标记酶为细菌提取碱性磷酸酯酶时，底物显色液为对硝基磷酸盐缓冲液、终止液为1～2mol/L氢氧化钠。

8.如权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于：浓缩洗涤液为pH值为7.2～7.6，含有1.0％～3.0％吐温-20，0.02～0.04‰硫柳汞防腐剂的磷酸盐缓冲液；浓缩复溶液为含有pH值为7.0～7.4，4-7％牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液，苏丹红标准品溶液的浓度分别为0μg/L，0.5μg/L，1.5μg/L，4.5μg/L，13.5μg/L，40.5μg/L。

9.权利要求1～8任一项所述的试剂盒在检测苏丹红药物残留中的应用。

10.一种检测样品苏丹红药物残留的方法，包括步骤：

1)样品前处理；

2)用权利要求1-8任一项所述的试剂盒进行检测；

3)分析检测结果。