[发明专利]检测苏丹红和对位红药物的酶联免疫试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及酶联免疫检测技术，具体涉及一种用于检测苏丹红和对位红药物的酶联免疫试剂盒，其特别适于辣椒酱、辣椒油、饲料样本中苏丹红和对位红药物残留的检测。

技术背景

苏丹红(SudanI)属于人工合成偶氮类化工染料之一，主要用于机油、蜡和鞋油等工业产品的染色。国外动物实验表明，苏丹红染料会导致鼠类患癌，其代谢产物苯胺可直接作用于人体肝细胞，从而引起中毒性肝病，长期摄入苯胺可造成人体的神经系统损害，为此国际癌症研究机构将其列为第三类可致癌物质。这类物质虽缺乏足够的直接使人类致癌的证据，但是所具有的潜在致癌危险是无可置疑的，如果短期内大量食用则会引起死亡。因此世界各国都禁止将苏丹红作为食品生产中的添加剂，1995年欧盟禁止将苏丹红作为食用色素在食品中添加，我国《食品添加剂使用卫生标准》(GB2760-1996)也不允许在食品中添加苏丹红。

目前国内外有关食品中苏丹红检测方法大都采用液相色谱法或液相与质谱联用的方法进行检测，但上述几种检测方法所使用的设备价格昂贵，检测过程繁琐，不适合现场监控和大量样本筛查。

发明内容

本发明的目的在于针对上述不足提供一种用于苏丹红和对位红药物检测的酶联免疫试剂盒，其操作简单适，适合现场大批量样品的筛选。

本发明试剂盒，它含有：

(1)包被有包被原的酶标板(包被原为抗原、抗体或抗抗体)；

(2)酶标记物(为酶标记半抗原、酶标记抗体或酶标记抗抗体)；

(3)苏丹红特异性抗体工作液(当酶标板上包被抗原且酶标记物为酶标记抗抗体或酶标板上包被抗抗体且酶标记物为酶标记抗原时含有)；

(4)苏丹红标准品溶液；

(5)底物显色液；

(6)终止液；

(7)浓缩洗涤液；

(8)浓缩复溶液。

本发明所提供的检测苏丹红和对位红药物的酶联免疫试剂盒，包括苏丹红特异性抗体工作液及预包被包被原的酶标板和酶标记物工作液；所述酶标记物为酶标记的抗抗体，酶标记苏丹红半抗原或酶标记苏丹红特异性抗体；所述抗抗体为羊抗鼠抗抗体或羊抗兔抗抗体。

所述苏丹红抗原是由苏丹红半抗原与载体蛋白偶联得到，所述苏丹红抗体是由苏丹红抗原制备获得。

所述苏丹红抗原是通过下述步骤得到的：

1)取对二氨基联苯25mg，加入0.2mol/L盐酸4.5ml溶解，冰浴；

2)取亚硝酸钠10-20mg用0.5ml水溶解后加入(1)中，在冰上搅拌反应0.5-1小时，取一部分用于下步反应，其余分装-20℃保存；

3)取20-100mgBSA用PH9.0，5ml硼酸缓冲液溶解，制备成BSA溶液；

4)取5-20mgβ-萘酚用PH9.0，5ml硼酸缓冲液溶解，制备成β-萘酚溶液；

5)将BSA溶液和β-萘酚溶液混合后放在冰上，加入1-3ml重氮化的对二氨基联苯溶液，避光反应12-24h；

6)用PH7.4，0.01mol/L的磷酸盐缓冲液透析三天，每天换液3次，得到苏丹红完全抗原。

所述酶标记物的标记酶为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酯酶，其中优选辣根过氧化物酶；酶标记的羊抗鼠抗抗体或羊抗兔抗抗体是采用戊二醛法或过碘酸钠法将标记酶与抗抗体进行偶联得到的；酶标记苏丹红半抗原是采用混合酸酐或碳化二亚胺法将标记酶与苏丹红半抗原偶联得到的；酶标记特异性抗体是采用戊二醛法或过碘酸钠法将标记酶与特异性抗体偶联得到的，辣根过氧化物酶可采用现有技术中的多种方法将其与抗抗体进行偶联，如戊二醛法，过碘酸钠法等，本发明经过长期的劳动创造将过碘酸钠法进行了改良，使其省时、降低辣根过氧化物酶(HRP)与抗抗体的浓度比率，节省了原材料。

所述苏丹红特异性抗体可为苏丹红单克隆抗体或苏丹红多克隆抗体；它们均是用苏丹红半抗原与载体蛋白偶联物作为免疫原得到的；所述苏丹红多克隆抗体可为鼠源、马源、兔源抗体，所述苏丹红单克隆抗体优选为苏丹红鼠单克隆抗体，所述苏丹红多克隆抗体优选为苏丹红兔多克隆抗体。

以上抗体均可以用苏丹红半抗原与载体蛋白的偶联物作为免疫原制备。所述载体蛋白可为牛血清蛋白、卵清蛋白、人血清白蛋白、甲状腺蛋白、血蓝蛋白；所述苏丹红半抗原与载体蛋白的偶联物通过将苏丹红半抗原和载体蛋白用重氮化法偶联得到。

为了更方便现场监控和大量样本筛查，所述试剂盒还包括苏丹红标准品溶液、显色剂、终止液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液。