[发明专利]一种呼吸道合胞病毒体疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种呼吸道合胞病毒体疫苗，其特征在于该疫苗含有呼吸道合胞病毒的完整病毒表面所组成的病毒体(Virosome)，即呼吸道合胞病毒体(RS Virosome)，该Virosome具有和活病毒完全一致的表面结构和功能；该呼吸道合胞病毒体疫苗还携带有RSV天然病毒的表面G、F、SH糖蛋白及脂质双脂层有效抗原成分，其中，所述RSV Virosome包括RSV A亚型RS Virosome A和B亚型RS Virosome B。

2.如权利要求1所述的呼吸道合胞病毒体疫苗，其特征在于该疫苗中不含有佐剂。

3.如权利要求1所述的呼吸道合胞病毒体疫苗，其特征在于该疫苗中含有佐剂；其中，所指佐剂为如下中的一种：①氢氧化铝或磷酸铝；②SP01佐剂：由角鲨烯、聚氧乙烯蓖麻油和聚醚水包油组成水包油佐剂；③SP02佐剂：在SP01佐剂中加20μg重组细菌鞭毛蛋白或P3BSK4；④P3BSK4(N-palmitoyl-S-[2，3-bis(palmitoy-loxy)-(2RS)-propul]-[R]-propyl-[R]-cysteinyl-[S]-seryl-[S]-(lysyl)3-lysine)；⑤水凝胶佐剂：季胺化的壳聚糖、⑥rLT：重组不耐热性肠毒素。

4.如权利要求1-3任一所述的呼吸道合胞病毒体疫苗，其特征在于该疫苗制备成临床可接受的剂型：注射剂型、喷鼻剂型、舌下含片、透皮贴剂或微针剂型。

5.如权利要求1-3任一所述的呼吸道合胞病毒体疫苗，其特征在于该疫苗为如下中的一种：RS Virosome A疫苗、RS Virosome B疫苗、RS Virosome A+RS Virosome B(RSV Virosome A+B)疫苗。

6.如权利要求1-2任一所述的呼吸道合胞病毒体疫苗的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤：①在宿主细胞系中培养大量增殖病毒；②收集并纯化病毒；③用去污剂裂解病毒，使病毒表面包膜携带跨膜蛋白一起溶解于去污剂中；④通过超离心，去除病毒核心；⑤通过透析，去除去污剂，使破碎的病毒表面包膜重新组装成携带有跨膜蛋白的完整RS Virosome；⑥提供一种用于繁殖RSV的细胞系，经转染后可以高效率释放RSV；⑦呼吸道合胞病毒体按常规方法制成疫苗，再进一步制备成临床可接受的剂型：注射剂型、喷鼻剂型、舌下含片、透皮贴剂或微针剂型；

其中，所述RS Virosome包括RSV A亚型RS Virosome A及B亚型RS Virosome B。

7.如权利要求3所述的呼吸道合胞病毒体疫苗的制备方法，其特征在于向该呼吸道合胞病毒体引入脂类佐剂的方法包括如下步骤：①病毒收集并纯化；②加入去污剂，裂解病毒，并通过超离心去除病毒核心；③同时用所述去污剂溶解佐剂；④将按2∶1∶3.5∶3.5的比例配制的PC/PE/SM/Chol溶解在按2∶1配制的氯仿/甲醇溶剂中；将溶液布满在玻璃试管的管壁上，使其干燥为薄膜，并在真空环境中，使残留溶剂挥发完全；⑤将步骤②所述溶解有病毒包膜的去污剂、以及步骤③所述溶解有佐剂的去污剂加入步骤④中；⑥透析去除去污剂，重建病毒体；⑦提供一种用于繁殖RSV的细胞系，经转染后可以高效率释放RSV；⑧呼吸道合胞病毒体按常规方法制成疫苗，再进一步制备成临床可接受的剂型：注射剂型、喷鼻剂型、舌下含片、透皮贴剂或微针剂型；

其中，所述脂类佐剂为①P3BSK4(N-palmitoyl-S-[2，3-bis(pal-mitoyloxy)-(2RS)-propul]-[R]-propyl-[R]-cysteinyl-[S]-seryl-[S]-(lysyl)3-lysine)；②重组细菌鞭毛蛋白。

8.如权利要求6或7所述的呼吸道合胞病毒体疫苗的制备方法中，其特征在于其中RSV细胞的培养方法为：在细胞培养基中加入2-100μg/mL的糖胺聚糖，其中，所指糖胺聚糖为硫酸肝素、硫酸软骨素B、硫酸透明质酸或肝素。

9.如权利要求8所述的呼吸道合胞病毒体疫苗的制备方法中，其特征在于在细胞培养基中加入的糖胺聚糖的浓度为10μg/mL。