[发明专利]一种呼吸道合胞病毒体疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种呼吸道合胞病毒体疫苗及其制备方法，特别涉及一种具有呼吸道合胞病毒完整表面抗原的病毒体(Virosome)疫苗及其制备方法。

背景技术

呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus，RSV)，是在世界范围存在并引起婴幼儿下呼吸道感染的主要原因之一，RSV感染可以引起一系列的呼吸道疾病，从简单的感冒症状到严重的下呼吸道感染及并发症。RSV的首次感染多发生于2月龄婴儿，感染率高达83％，且感染后不会产生持久的免疫力，有50％的婴幼儿会在首次感染后的1～2年再次感染。同时，RSV在青少年、老年人以及免疫缺陷人群中也是一种常见而重要的病原体。RSV属于副粘病毒科、肺炎病毒属的单股负链非节段性RNA病毒，其核心是由核衣壳包裹的RNA、外层包被有出芽时来自宿主的脂质双分子层、以及穿越其中的跨膜蛋白组成。RSV的RNA共编码10种蛋白质：三个跨膜蛋白(G、F、SH)、两个基质蛋白(M、M2)、三个核衣壳蛋白(N、P、L)和两个非结构蛋白(NS1、NS2)。其中三种跨膜糖蛋白与免疫保护及致病毒力密切相关，分别是融合蛋白(F)、黏附蛋白(G)、以及小疏水蛋白(SH)。研究显示，抗F抗体可以阻止RSV与宿主细胞融合，而抗G抗体可以阻止RSV向宿主细胞的贴附，这使得F蛋白和G蛋白被认为是RSV的主要保护性抗原。F蛋白是RSV的一个重要保护性抗原，它是保护性中和性抗体的一个重要靶位点。同时有证据表明，F蛋白还是CD8+T细胞的一个重要靶位点。G蛋白有一个疏水的N末端，通过该N末端把G蛋白锚定在病毒脂质包膜上，根据所暴露的胞外区蛋白序列的差异，可将RSV分为A和B两个亚型。同时G蛋白还存在另外一种分泌型G蛋白，分泌型G蛋白缺少了N末端的65个氨基酸残基，只留高度糖基化的胞外区，有研究表明，该分泌型片断有可能导致免疫应答向Th2方向发展。由此，RSV感染宿主诱发异常天然免疫与获得免疫应答是导致Th1/Th2平衡失调并造成免疫损伤的危险信号。

众所周知，疫苗是防控传染病最有效的手段，至今还没有被批准的疫苗用于RSV免疫预防。近年研究显示，RSV感染对固有免疫应答能力弱，使得Th2免疫应答强，造成Th1/Th2平衡失调，产生大量炎性分子与趣化因子，且产生中和性抗体不成熟，引起免疫损伤是RSV疫苗研究的科学问题。在上世纪70年代，美国首次推出的福尔马林灭活RSV疫苗(FI-RSV疫苗)，接种2～7个月的婴幼儿，有80％的婴幼儿出现了病情加重，且有两例死亡，由此发现死者肺部出现了大量的嗜酸性细胞浸润和炎性分子与趣化因子，使得Th1/Th2平衡紊乱。因为FI-RSV引起了过高的Th2免疫应答反应，造成CD4+T细胞激活和增殖后分泌一些炎性与趣化因子，且加速了肺部的嗜酸性粒细胞、中性粒细胞的产生和浸润、产生低亲和力保护性抗体，另外损伤了CD8+T细胞活性和功能，最终导致了RSV清除过程缓慢、肺部损伤及病毒开始大量传播，由此F1-RSV疫苗以失败而告终。由此克服这几个难点，是开发RSV疫苗的基本原则。近些年国外学者开展一种温度敏感型RSV弱毒苗和一种携带RSV的F蛋白的重组人/牛副流感病毒活疫苗、RSV重组亚单位疫苗类型及佐剂与免疫途径等研究，其目的是改变免疫应答类型，使得Th1/Th2免疫应答趋于平衡，有了实质性进展。因此，寻找新的技术策略、研发免疫应答平衡的RSV疫苗，是安全、有效免疫防控RSV的重大科学前提。