[发明专利]检测豇豆胰蛋白酶抑制剂的免疫胶乳微球及其制备方法

权利要求书

1.一种检测豇豆胰蛋白酶抑制剂的免疫胶乳微球，其特征在于：免疫胶乳微球由抗CpTI蛋白多克隆抗体包被，微球颗粒大小为200nm，最低检测限为CpTI融合蛋白0.2 μg/ml，相关系数R²=0.67。

2.根据权利要求1所述的检测豇豆胰蛋白酶抑制剂的免疫胶乳微球，其特征在于，所述免疫胶乳微球是单分散羧基化聚苯乙烯微球，颗粒大小为200nm，表面载基团为羧基。

3.一种检测豇豆胰蛋白酶抑制剂的免疫胶乳微球的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）设计全长CpTI基因序列，根据原核细胞表达的优先密码子重新修饰并采用全基因合成技术构建全长CpTI基因表达序列；

2）将步骤1）得到的CpTI基因片段通过限制酶切割插入谷胱甘肽-S-转移酶（GST）基因融合表达载体中，构建细菌融合表达载体；

3）通过步骤2）对表达载体进行细菌表达后，利用亲合层析柱纯化获得GST-CpTI融合蛋白；

4）将经过步骤3）得到的GST-CpTI融合蛋白抗原溶合弗氏佐剂后免疫小鼠，经分离纯化得到鼠抗CpTI多克隆抗体；

5）将经过步骤4）得到的鼠抗CpTI多克隆抗体通过羧基-氨基化学偶联法偶联活化微球，得到检测CpTI蛋白的免疫胶乳微球。

4.根据权利要求3所述的检测豇豆胰蛋白酶抑制剂的免疫胶乳微球的制备方法，其特征在于，在步骤2）中：所述谷胱甘肽-S-转移酶（GST）基因融合表达载体是pGEX-4T-2，构建完成后的融合表达载体是pGEX-4T-2-CpTI。

5.根据权利要求3所述的检测豇豆胰蛋白酶抑制剂的免疫胶乳微球的制备方法，其特征在于，在步骤3）中：所述亲合层析柱为谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B。

6.根据权利要求3-5任一项所述的检测豇豆胰蛋白酶抑制剂的免疫胶乳微球的制备方法，其特征在于，在步骤5）中：所述免疫胶乳微球是单分散羧基化聚苯乙烯微球，颗粒大小为200nm，表面载基团为羧基；所述免疫胶乳微球的活化是首先用碳化二亚胺活化微球，然后加入N-羟基硫代琥珀酰亚胺使微球形成稳定的活泼酯中间体，以备连接抗体分子之用。