[发明专利]快速检测柯萨奇病毒A16型的荧光定量PCR试剂盒

权利要求书

1.一种快速检测柯萨奇病毒A16型的荧光定量PCR试剂盒，其特征在于包括：

RNA提取液、荧光定量PCR反应液、CA16标准阳性模板PMD18-T-CA16和阴性质控标准品；

所述的荧光定量PCR反应液含有柯萨奇病毒A16型特异性引物对和荧光探针；

正向引物为5′-TCARTTCYATGGCTACAGGTYAAGR-3′，

反向引物为5′-CTAGRCATTGCTYGTGATTCTG-3′，

其中正向引物可向5’和3’端方向各延伸10个碱基，反向引物可向5’和3’端方向各延伸10个碱基；

荧光探针序列为5′-TGCTCATCGCCTACACCY-3′，该荧光探针序列可向5’和3’端方向各延伸10个碱基，荧光探针5′端标记报告荧光基团FAM，3′端标记不发光的淬灭基团标记Eclipse，可以大大减少背景噪音的干扰，CA16标准阳性模板PMD18-T-CA16是含有柯萨奇病毒A16型VP1基因的85个碱基对的核苷酸片段构成的PMD18-T载体，该载体在大肠杆菌DH5α中增殖。

2.按权利要求1所述的PCR试剂盒，其特征在于CA16标准阳性模板PMD18-T-CA16包含的VP1基因片段的核苷酸序列为：

TCATTCATGGCTACAGGTAAGATGCTCATCGCCTACACCCCACCCGGGGGAAGTGTGCCTGCGGACAGAATCACAGCAATGCTAG。

3.按权利要求1所述的PCR试剂盒，其特征在于阴性质控标准品为：

无菌双蒸水。

4.按权利要求1所述的PCR试剂盒的制备和检测方法，其特征在于包括下列步骤：

①配制RNA提取液；

②配制荧光定量PCR反应液；

③配制CA16标准阳性模板PMD18-T-CA16；

④配制阳性定量标准品；

⑤配制阴性质控标准品；

⑥判断未知样本的阴阳性。