[发明专利]快速检测柯萨奇病毒A16型的荧光定量PCR试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种引起人类多种疾病病原体基因检测技术，尤其涉及一种快速检测柯萨奇病毒A16型荧光定量PCR试剂盒，适用于柯萨奇病毒A16型的定性定量检测。

背景技术

柯萨奇病毒(Coxsackievirus，CV)是一类肠道病毒，因1948年首次在美国纽约州柯萨奇村发现而被命名。该病毒属于小核糖核酸(Ribonucleic Acid，RNA)病毒科(Picornavi ridae)，肠道病毒属(Enterovirus)，是多种人类疾病的致病病原，致病谱广，可引起呼吸道感染、结膜炎、发热性皮疹、手足口病(Hand，Foot and Mouth Disease，HFMD)、疱疹性咽峡炎、心肌炎、心肌病及无菌性脑膜炎、脑炎和急性弛缓性麻痹等疾病。

迄今为止，柯萨奇病毒共有30个血清型，分为A和B两组，已知A组有24型，B组有6型，其中，CV A组16型(CV Group A 16 Strain，CVA16)是引起儿童HFMD的主要病原之一。与另一种HFMD的致病原-----人肠道病毒71型(HumanEnterovirus 71Strain，HEV71)相比，CVA16所致HFMD症状相对较轻，一般不合并严重的并发症，疾病过程多为自限性，所以对其研究较少。但是由于近20多年HFMD在全球，尤其是亚洲太平洋地区周期性爆发，并且疫情较为严重，所以对该病的主要致病原CVA16和HEV71的研究越来越受到人们的重视。

近年来发展起来的荧光定量PCR(Fluorescence Quantitative PCR，FQ-PCR)技术以其灵敏度高、速度快、特异性强等优点在基因表达水平分析和定量检测(Eng Lee Tan，Vincent Tak Kwong Chow，Development of multiplex real-timehybridization probe reverse transcriptase polymerase chain reaction forspecific detection and differentiation of Enterovirus 71 andCoxsackievirus A16，Diagnostic Microbiology and Infectious Disease 61(2008)294-301；Tsao KC，Chang PY，Ning HC，Sun CF，Lin TY，Chang LY，Huang YC，Shih SR(2002)Use of molecular assay in diagnosis of hand，footand mouth disease caused by enterovirus 71 or coxsackievirus A16.J VirolMethods 102：9-14；Chen TC，Chen GW，Hsiung CA，Yang JY，Shih SR，Lai YK，Juang JL(2006)Combining multiplex reverse transcription-PCR and adiagnostic microarray to detect and differentiate enterovirus 71 andcoxsackievirus A16.J Clin Micro 44：2212-2219.)等方面得到广泛应用，并且已经成为当前病毒核酸定量的主要方法，国内目前已有关于丙肝、乙肝、支原体、衣原体、艾滋病、结核定量检测的试剂盒上市。

临床检测上传统的培养法和血清学方法具有灵敏度低、特异性差、假阳性、耗时费力等缺点；常规PCR法虽然有简便、快速、灵敏的优势，但是有不能精确定量和PCR后处理产生污染导致的假阳性等问题；因此亟待开发精确、灵敏、快速、无污染的临床检验方法。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的缺点和不足，提供一种快速检测柯萨奇病毒A16型的荧光定量PCR试剂盒。

本发明采用以下技术方案：

一、PCR试剂盒

该试剂盒包括：RNA提取液(即TRIZOL核酸抽提试剂)、荧光定量PCR反应液、CA16标准阳性模板PMD18-T-CA16和阴性质控标准品；

1、荧光定量PCR反应液含有柯萨奇病毒A16型特异性引物对和荧光探针

1)柯萨奇病毒A16型

正向引物为5′-TCARTTCYATGGCTACAGGTYAAGR-3′，

反向引物为5′-CTAGRCATTGCTYGTGATTCTG-3′，