[发明专利]一种猪链球菌2型高密度发酵培养基及应用

说明书

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种适合猪链球菌2型大规模培养的发酵培养基及其制备方法与应用。

技术背景

猪链球菌2型(Streptococcus suis)作为危害猪的主要细菌病原(Lun ZR，2007)，它有33个血清型，其中猪链球菌2型(简称S.Suis 2)最为普遍，会导致猪一系列疾病，如髓膜炎、关节炎、败血症、心内膜炎、浆膜炎、流产、脓肿，严重致死。另外S.Suis 2还会感染人，引起脑膜炎(WertheimHF，2009)。猪链球菌2型已成为养猪国家的主要问题，给养猪业造成极为严重的经济损失。

虽然关于猪链球菌2型的研究比较多，并取得一定成果，但是其培养方面的相关报道很少，尤其对于猪链球菌2型的培养没有固定的培养基。目前国内外较多应用一种商业培养基为TSB来培养猪链球菌2型。这种培养基虽然使用方便，但在培养过程中，具有菌体生长缓慢，成本高等缺点，其发酵终点的活菌数为10～20亿，不适合大规模增菌使用。

猪链球菌2型的生长繁殖所需条件较高，其培养基中需要含有多种物质，特别是氮源要丰富。现今常用的TSB培养基，其主要成分为胰蛋白胨，另外其含有0.25％的葡萄糖，0.25％的K₂HPO₄和0.5％的NaCl，并不完全适合猪链球菌2型的生长代谢的需要。因此，完全有必要研制并开发适合工业规模化生产，且原料来源广泛，价格低廉，能大幅度提高活菌数的培养基。

发明内容

本发明是针对猪链球菌2型所设计的培养基。通过单因素方法、Plackett-Burman设计、最陡爬坡试验、响应面方法优化的猪链球菌2型培养基既能保证猪链球菌2型生长旺盛，进行正常代谢，又能提高生长速度，缩短生产时间，完全能适应于疫苗生产。本发明的培养基发酵终点活菌数为80-90亿，较常用商业培养基TSB培养基提高5倍以上。

本发明通过下列技术方案完成：

一种适用于猪链球菌2型高密度发酵培养基，按重量体积比计的组分及配比如下：胰蛋白胨0.1％～5.0％、酵母粉0.1％～5.0％、醋酸铵0.01％～2.0％、MgSO₄·7H₂O 0.01％～2％、K₂HPO₄·3H₂O 0.1％～4.0％、KH₂PO₄ 0.01％～1％和葡萄糖0.01％～2.0％；按体积比的牛血清1％～15％，余量是水，灭菌前调培养基的pH至7.4～7.8。

作为优选方案之一，按重量体积比计的组分及配比如下：胰蛋白胨0.5％～4.0％、酵母粉0.5％～4.0％、醋酸铵0.05％～1.0％、MgSO₄·7H₂O 0.03％～1.5％、K₂HPO₄·3H₂O 0.05％～3.0％、KH₂PO₄ 0.05％～0.8％、葡萄糖0.05％～1.5％；按体积比的牛血清为2％～12％，余量是水，灭菌前调培养基的pH为7.4～7.8。

作为优选方案之二，按重量体积比计的组分及配比如下：胰蛋白胨1.0％～3.0％、酵母粉1.0％～3.0％、醋酸铵0.1％～0.5％、MgSO₄·7H₂O 0.1％～1.0％、K₂HPO₄·3H₂O 1％～2.0％、KH₂PO₄0.1％～0.5％、葡萄糖0.1％～1.0％；按体积比的牛血清为3％～10％，余量是水，灭菌前调培养基的pH至7.4～7.8。

本发明的培养基的制备方法，其步骤包括：

A、按上述所示的配方量，将胰蛋白胨，酵母粉，醋酸铵，MgSO₄·7H₂O，用蒸馏水溶解后，定容至1000ml，灭菌调培养基的pH至7.4～7.8，在115～121℃下高压蒸汽下灭菌15～25min；

B、称取葡萄糖100g，定容至1000ml，在110～115℃高压蒸汽下灭菌15～25min；