[发明专利]一种抗三聚氰胺单克隆抗体及检测三聚氰胺的试剂盒

权利要求书

1.一种产生抗三聚氰胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其保藏号为CGMCCNo.4303，分类命名为三聚氰胺特异性淋巴细胞杂交瘤株B-4B5-F10-B11。

2.一种制备权利要求1所述产生抗三聚氰胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)制备6碳三聚氰胺-载体蛋白藕联物，所述载体蛋白为钥孔嘁血蓝蛋白、牛血清蛋白或卵清蛋白，所述6碳三聚氰胺的结构如下：

(2)动物免疫

以步骤1所述6碳三聚氰胺-载体蛋白藕联物为免疫原免疫小鼠，取免疫后小鼠的血清，检测该血清抗三聚氰胺的效价和抑制价，选取效价和抑制价最高的免疫小鼠；

(3)细胞融合

取步骤(2)所得免疫小鼠的脾脏细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合，培养；

(4)杂交瘤细胞株的筛选

检测各融合细胞培养后的上清液的抗体效价及抑制价，选取抗体效价及抑制价最高的命名为三聚氰胺特异性淋巴细胞杂交瘤株B-4B5-F10-B11。

3.一种由权利要求1所述杂交瘤细胞株分泌的抗三聚氰胺单克隆抗体。

4.一种权利要求3所述杂交瘤细胞株分泌的抗三聚氰胺单克隆抗体的制备方法，包括如下步骤：

(1)腹水的制备：将所述杂交瘤细胞株注入baleb/c雌性小鼠腹腔，5-7后天产生腹水；取腹水上清；

(2)抗三聚氰胺单克隆抗体的纯化：

初步纯化：所述腹水上清经饱和硫酸胺沉淀，取沉淀溶解后透析，获得抗三聚氰胺单克隆抗体粗品；

Protein G亲和层析纯化：将抗三聚氰胺单克隆抗体粗品经Protein G亲和层析柱进行纯化，收集吸收峰，即为抗三聚氰胺单克隆抗体。

5.一种权利要求3所述抗三聚氰胺单克隆抗体应用于三聚氰胺的定性或定量检测。

6.一种利用权利要求3所述抗三聚氰胺单克隆抗体检测三聚氰胺的试剂盒，其特征在于该试剂盒的组成如下：

(1)用6碳三聚氰胺-OVA藕联物的碳酸盐缓冲液包被过的酶标板；

(2)HRP标记的抗三聚氰胺单克隆抗体溶液；

(3)TMB显色剂：TMB浓度是0.3g/L；

(4)终止液：浓度为2M的H₂SO₄；

(5)三聚氰胺标准液：浓度分别为0，0.5，1.5，4.5，13.5，40.5μg/L的三聚氰胺标准液；

(6)20倍浓缩洗液：浓度为0.2M，pH为7.4的PBST。