[发明专利]用于感染性腹泻的检测型基因芯片及检测用试剂盒

权利要求书

1.一种用于感染性腹泻的检测型基因芯片，包括固相载体和固定在该固相载体上的寡聚核苷酸探针，其特征在于所述的寡聚核苷酸探针包含从具有明显生物进化优势的gyrB基因、ITS基因及dnaJ、toxR等基因上选取的DNA片段或其互补的DNA片段。

2.权利要求1所述的基因芯片，其中的寡聚核苷酸探针为下述DNA片段中的至少一种：

①大肠杆菌(E.coli)/志贺氏菌(Shigella)、小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersiniaenterocolitica)及亲水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)gyrB基因中所选取的至少一种DNA片段；

②沙门氏菌(Salmonella)、霍乱弧菌(Vibrio cholerae)、副溶血弧菌(Vibrioparahaemolyticus)ITS基因中选取的至少一种DNA片段；

③河流弧菌(Vibrio fluvialis)、拟态弧菌(Vibrio mimicus)、弗尼斯弧菌(Vibriofrnissii)的dnaJ基因中选取的DNA片段；

④霍利斯弧菌(Vibrio hollisae)、少女鱼弧菌(Vibrio damsela)toxR基因中选取的DNA片段；

⑤邻单胞菌hugA基因中选取的DNA片段；

⑥志贺氏菌ipaH基因中选取的DNA片段；

⑦①或②或③或④或⑤或⑥中选取的DNA片段的互补DNA片段。

3.权利要求1所述的基因芯片，其中所述寡聚核苷酸探针具有SEQ ID NO：1-31所示的核苷酸序列或不同于SEQ ID NO：1-31但编码的氨基酸序列与SEQ ID NO：1-31所编码的氨基酸序列相同的核苷酸序列。

4.权利要求1所述的基因芯片，其中所述的感染性腹泻为：引起人类感染性腹泻的大肠杆菌、志贺氏菌、沙门氏菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌、亲水气单胞菌、邻单胞菌、霍利斯弧菌、河流弧菌、拟态弧菌、少女鱼弧菌、弗尼斯弧菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌。

5.权利要求1所述用于感染性腹泻的检测型基因芯片的制备方法，其特征在于：按如下的步骤进行：

1)根据病原菌的gyrB基因、ITS基因、dnaJ基因及toxR基因、hugA基因、ipaH基因保守区设计并制备出用于PCR扩增的引物； 

2)制备待测样品的基因组DNA，使用步骤1)中的引物，对待测样品基因组DNA进行PCR扩增，得到靶序列；

3)标记步骤2)中得到的靶序列；

4)将标记后的靶序列与上述的基因芯片杂交；

5)用生物芯片扫描仪获取杂交信号并分析杂交结果。

其中，步骤1)中所述的引物包括SEQ ID NO：32-45所示的核苷酸序列的至少一种。

6.一种采用权利要求1所述基因芯片检测感染性腹泻的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括SEQ ID NO：1-31的核苷酸序列或其互补核苷酸序列的至少一种；还包含PCR扩增的引物，该引物具有SEQ ID NO：32-45的核苷酸序列的至少一种；

7.权利要求6所述的试剂盒的应用，其特征在于，可用于引起人类感染性腹泻的大肠杆菌、志贺氏菌、沙门氏菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌、亲水气单胞菌、邻单胞菌、霍利斯弧菌、河流弧菌、拟态弧菌、少女鱼弧菌、弗尼斯弧菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌的至少一种致病菌的检测。