[发明专利]一种H9亚型禽流感病毒检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种检测H9亚型禽流感病毒的专用引物，由以下三对环介导等温扩增所用引物组成；一对引物是与H9亚型禽流感病毒的HA基因结合的内侧引物对，一对引物是与H9亚型禽流感病毒的HA基因结合的外侧引物对，一对引物是与H9亚型禽流感病毒的HA基因结合的环形引物对；所述HA基因如GenBank Accession Number EU644482中所示。

2.如权利要求1所述的专用引物，其特征在于：所述内侧引物对由上游引物FIP和下游引物BIP组成，所述上游引物FIP的核苷酸序列是序列表中的序列4，所述下游引物BIP的核苷酸序列是序列表中的序列5；所述外侧引物对由上游引物F3和下游引物B3组成，所述上游引物F3的核苷酸序列是序列表中的序列2，所述下游引物B3的核苷酸序列是序列表中的序列3；所述环形引物对由上游引物LF和下游引物LB组成，所述上游引物LF的核苷酸序列是序列表中的序列6，所述下游引物LB的核苷酸序列是序列表中的序列7。

3.权利要求1或2所述的专用引物在制备试剂盒中的应用；所述试剂盒用于辅助鉴定H9亚型禽流感病毒和/或检测待测样本是否含有H9亚型禽流感病毒。

4.一种含有权利要求1或2所述的专用引物的试剂盒；所述试剂盒用于辅助鉴定H9亚型禽流感病毒和/或检测待测样本是否含有H9亚型禽流感病毒。

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括溶液A；所述溶液A是将溶质溶于水得到的；所述溶质及其浓度如下：KCl为16.67nmol/μl，MgSO₄·7H₂O为13.33nmol/μl，(NH₄)₂SO₄为16.67nmol/μl，钙黄绿素为0.083nmol/μl，MnCl₂·4H₂O为1nmol/μl，dNTPs各2.33nmol/μl，甜菜碱为0.33μmol/μl，Tris-HCl为33.33nmol/μl，Tween-20为0.17％(体积百分含量)，所述上游引物F3为0.28-0.39pmol/μl，所述下游引物B3为0.28-0.39pmol/μl，所述上游引物FIP为2.22-3.11pmol/μl，所述下游引物BIP为2.22-3.11pmol/μl，所述上游引物LF为1.11-1.55pmol/μl，所述下游引物LB为1.11-1.55pmol/μl。

6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述溶液A中，所述上游引物F3为0.33pmol/μl，所述下游引物B3为0.33pmol/μl，所述上游引物FIP为2.67pmol/μl，所述下游引物BIP为2.67pmol/μl，所述上游引物LF为1.33pmol/μl，所述下游引物LB为1.33pmol/μl。

7.如权利要求4或5或6所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括溶液B；所述溶液B由溶剂和溶质组成；所述溶剂为水；所述溶质及其浓度如下：Bst DNA聚合酶为7.52U/μl，AMV反转录酶为0.6U/μl。

8.一种检测来自死亡动物的样品中是否携带H9亚型禽流感病毒的方法，是用权利要求1或2所述专用引物对来自死亡动物的样品的总RNA进行反转录环介导等温扩增反应，检测扩增产物，确定来自死亡动物的样品中是否携带H9亚型禽流感病毒；所述环介导等温扩增反应的条件为：60-65℃、60-90分钟。

9.权利要求1或2所述专用引物或权利要求4至6中任一所述试剂盒在辅助鉴定H9亚型禽流感病毒中的应用。

10.权利要求1或2所述专用引物或权利要求4至6中任一所述试剂盒在检测待测样本是否含有H9亚型禽流感病毒中的应用。