[发明专利]用于检测胃癌易感性的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种疾病易感性检测用的试剂盒，尤其是一种检测胃癌易感性的试剂盒，通过检测MTHFR基因、CYP2E1代谢酶基因、XRCC1及ADPRT修复酶基因的单核苷酸多态性位点(SNP)，来预测个体对胃癌的易感性。

背景技术

胃癌是最常见消化道恶性肿瘤肿瘤之一，是严重威胁人类健康生命的常见病、多发病。据统计，全世界每年约有90万人新诊断为胃癌，在我国，胃癌占消化道恶性肿瘤第1位，全身恶性肿瘤第3位。根据卫生部卫生信息统计中心2001年公布的资料，恶性肿瘤是我国城市居民的第1位死因，死亡率为135.59/10万(24.9％)。其中，胃癌在恶性肿瘤死因中居第3位。胃癌的发生、发展同其他恶性肿瘤一样，属多因素、多步骤、多阶段和多基因改变过程。近年来，某些基因的单核苷酸多态性(SNP)在恶性肿瘤易感性研究中倍受关注，研究认为亚甲基四氢叶酸还原酶基因(Methylenetetrahydrofolate reductase，MTHFR)的C677T位点(rs1801133)，CYP2E1的rs2031920位点，X线修复交叉互补基团1(X-ray repaircross-complementing group 1，XRCC1)的Arg399Gln位点(rs25487)及二磷酸腺苷核糖基转移酶(Adenosine diphosphate ribotransferase，ADPRT)的Ala762Val位点(rs1136410)增加个体患胃癌的风险。

MTHFR定位于染色体1p36.3，整个编码区长1980bp，包括11个外显子，其cDNA序列全长2.2Kb。该基因的编码产物是含有656个氨基酸残基、相对分子量大约为150kDa的同源二聚体，其氨基酸序列高度保守。MTHFR基因有多种突变类型，不同的突变类型对MTHFR的酶活性和热稳定性产生不同的影响。至今，已发现MTHFR基因上有近30个SNP位点，其中已有18个cSNP在GenBank数据库登陆。1995年，有人发现了MTHFR的C677T位点。该位点位于MTHFR基因第4外显子的叶酸盐结合位点上。MTHFR基因第677位碱基胞嘧啶(C)被胸腺嘧啶(T)置换，从而使一个高度保守的丙氨酸(Ala)变成了缬氨酸(Val)。C677T位点位于MTHFR催化区域，该突变直接影响亚甲基四氢叶酸还原酶的活性和耐热性，表现为不同程度的酶活性降低并伴有耐热性降低。

叶酸是核苷酸DNA合成及甲基化的重要前体物质，叶酸缺乏通过干扰DNA合成和甲基化，进而影响癌症的发生。研究发现人群中MTHFR基因C677T位点变异导致酶活性下降，使总叶酸水平降低，特别是5-甲基四氢叶酸水平降低，5，50-亚基四氢叶酸积聚及细胞内叶酸衍生物构成发生变化。研究表明MTHFR基因677TT基因型多态性是胃癌的危险因素。

大多数化学物质需在代谢酶的作用下活化后才产生致癌效应，主要的代谢酶有氧化酶(I相)，如细胞色素P450氧化酶(CYPs)。前致癌物进入人体内经CYP450催化，转变成亲电子化合物攻击细胞内生物大分子，形成DNA加成物，启动致癌或致突变过程；由于这些酶的基因多态性引起酶分子结构、功能和水平改变，能影响细胞灭活致癌物和诱变剂的能力，进而被认为与肿瘤易感性有关。CYP2E1是其中的一种，编码二甲基亚硝胺D-脱甲基酶(Debrisoquine Hydroxylase，DBH)，主要参与食物中亚硝胺及其前体物和低分子量卤代烃类化合物在体内的代谢。该基因定位于人类染色体10q24.3-ter，长11.4kb，含9个外显子。CYP2E1的rs2031920位点，位于5-调控区内由C→T的置换所致，研究认为该位点多态性与CYP2E1代谢酶转录活性增强相关，其突变基因型的表达较野生基因型高，TT基因型增加患食管癌的风险。