[发明专利]持续焦虑小鼠特征蛋白质指纹图谱及其应用

权利要求书

1.持续焦虑小鼠特征蛋白质指纹图谱，其特征是应用SELDI技术对持续焦虑小鼠血清进行检测，在质荷比(M/Z)15000+H～16800+H之间产生的丰度≥5％的单组或双组峰簇。

2.根据权利要求1所述的持续焦虑小鼠特征蛋白质指纹图谱，其特征是在应用SELDI技术对持续焦虑小鼠血清进行检测时，使用CM10芯片。

3.根据权利要求1所述的持续焦虑小鼠特征蛋白质指纹图谱，其特征是检测的蛋白质指纹图谱质荷比下限为1+H，上限为25000+H。

4.持续焦虑小鼠特征蛋白质指纹图谱的构建方法，其特征是按照以下步骤进行：

1)以任意一种焦虑小鼠动物模型构建方法构建持续焦虑小鼠动物模型，摘取小鼠眼球取血，静置离心分离血清，-80℃低温冰箱保存；

2)自-80℃冰箱中取出血清样品，在冰浴上缓慢融解30～60min，4℃下10000rpm离心2min；向10μL U9血清处理液中加入上述血清5μL，4℃下在摇床上600rpm振荡30min，使充分混合，用Binding Buffer将U9处理后的血清稀释至200μL，4℃下在摇床上600rpm振荡30min，用于上样；

3)将CM10芯片放入盛有100mmol/L盐酸的试管中，振荡4～5min，液谱纯水冲洗，将芯片安装到Bio-processor上，每孔加200μL Binding Buffer，室温振荡5min，弃掉液体，重复一次；

4)取上述经U9处理并稀释过的血清100μL加到CM10芯片上，4℃下600rpm摇床上振荡充分反应1小时后，去除样品；

5)每孔加入200μL Binding Buffer，室温下摇床上600rpm振荡5min后除去液体，重复该过程2次，再用液谱纯水200μL快速清洗1次；

6)将芯片从Bio-Processor中取出，自然干燥，每点加50％饱和SPA 0.5μL，待其自然干燥后，重复点加1次，自然干燥；

7)在SELDI-TOF阅读器中检测CM10芯片，设定仪器初始激光强度195，灵敏度8，检测蛋白质分子量范围2000～20000Da，以质荷比为横轴、相对分子量为纵轴得到特征蛋白质指纹图谱。

5.根据权利要求4所述的持续焦虑小鼠特征蛋白质指纹图谱构建方法，其特征是以ProteinchipSoftware3.2软件校正原始数据，设置初始噪音过滤值5，二次噪音过滤值2，以10％为最小阈值进行聚类。

6.权利要求1所述持续焦虑小鼠特征蛋白质指纹图谱作为焦虑症界定值的应用。

7.权利要求1所述持续焦虑小鼠特征蛋白质指纹图谱在判别焦虑小鼠动物模型构建上的应用。