[发明专利]持续焦虑小鼠特征蛋白质指纹图谱及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及特征蛋白质指纹图谱检测技术领域，涉及一种持续焦虑小鼠的特征蛋白质指纹图谱，以及该持续焦虑小鼠特征蛋白质指纹图谱的应用。

背景技术

现代社会竞争不断加剧，由此引发的心理疾病日益增多，焦虑症作为一种普遍的心理障碍，也越来越大地威胁到人类的身心健康。流行病学研究表明，城市人口中大约有4.1～6.6％的人群患有得焦虑症，但是，目前焦虑症的临床诊断准确率与符合率却并不尽如人意。近年来，在肿瘤学的探讨中，心理社会因素日益受到学者们的关注，研究结果显示，心理因素在癌症的发生、发展和预后中有着不可忽视的作用。癌症作为一种心理应激，可导致抑郁、焦虑情绪，而抑郁、焦虑情绪又可加速癌症的恶化，降低患者的生活质量，影响癌症治疗的结局，增加医疗费用。癌症患者中焦虑抑郁症状的发生率明显高于正常人。

但是，当前国内外对于焦虑的研究仅限于量表的测评，例如SAS焦虑自评量表、HAMA焦虑量表等。上述各种焦虑评定量表具体操作方面专业性强，易受病人及评定人员主观因素的影响，影响观察的准确性和客观性，且实施起来较为复杂，量表评分不十分准确，有一定的差异。它们大多是很实用的筛选焦虑症的评定量表，但并不能准确地反映焦虑状态，因此仅能为临床诊断焦虑症提供参考，而不能作为诊断的主要参考依据。

2002年获得诺贝尔化学奖的蛋白质芯片表面加强激光解析电离飞行时间质谱技术(surface-enhanced laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometer，SELDI-TOF-MS)的问世，为生命科学领域提供了一种强有力的分析测试手段。SELDI技术主要结合了质谱、层析等技术原理对样品进行大规模检测，优势是操作简单易行，无需纯化，样本用量少并可同时进行高通量分析，可直接对粗样本血清、组织、细胞裂解液、尿液等进行检测，通过SELDI检测获得相关蛋白质指纹图谱，在蛋白分离方面具有不可比拟的优势。该方法可以快速地分析各种生物样品中蛋白质组的组成，在基础医学研究、临床疾病诊断以及药物研发方面显示出广阔的应用前景及临床意义。

近年来的研究结果显示，焦虑症或焦虑情绪可能与一些蛋白表达相关。但采用SELDI技术检测焦虑患者血清蛋白质指纹图谱的研究，尚未见公开文献报道。

发明内容

本发明的目的是建立一种持续焦虑小鼠的特征蛋白质指纹图谱，以提高对于持续焦虑症的判读准确性。

提供持续焦虑小鼠特征蛋白质指纹图谱的应用，是本发明的另一发明目的。

本发明的持续焦虑小鼠特征蛋白质指纹图谱是应用SELDI技术对持续焦虑小鼠血清进行检测，在质荷比(M/Z)15000+H～16800+H之间产生的丰度≥5％的单组或双组峰簇。

本发明在应用SELDI技术对持续焦虑小鼠的血清进行检测时，选择的是CM10芯片(弱阳离子交换芯片)。将使用CM10芯片检测的新鲜血清和储存在-80℃低温冰箱内的同一血清的蛋白质指纹图谱进行比较，未发现有明显的峰值变化。CM10芯片的活性表面由弱羧基阴离子构成，通过离子亲和作用与蛋白质分子中带有正电荷的赖氨酸、精氨酸、组氨酸等氨基酸残基结合，作为WCX2芯片的改进型，在蛋白质结合区的周围有疏水涂层，使得蛋白质与芯片的结合更均匀。因此本发明选择变异性小，稳定性和可重复性较高的CM10芯片。

本发明在应用SELDI技术对持续焦虑小鼠的血清进行检测时，检测到的蛋白质指纹谱型的质荷比(M/Z)下限为1+H，上限为25000+H。

本发明应用SELDI技术对持续焦虑小鼠血清进行检测的具体方法是：

1)以任意一种焦虑小鼠动物模型构建方法构建持续焦虑小鼠动物模型，摘取小鼠眼球取血，静置离心分离血清，-80℃低温冰箱保存。

2)自-80℃冰箱中取出血清样品，在冰浴上缓慢融解30～60min，4℃下10000rpm离心2min；向10μL U9血清处理液中加入上述血清5μL，4℃下在摇床上600rpm振荡30min，使充分混合，用Binding Buffer将U9处理后的血清稀释至200μL，4℃下在摇床上600rpm振荡30min，用于上样。

3)将CM10芯片放入盛有100mmol/L盐酸的试管中，振荡4～5min，液谱纯水冲洗，将芯片安装到Bio-processor上，每孔加200μLBinding Buffer，室温振荡5min，弃掉液体，重复一次。