[发明专利]拟茎点霉属内生真菌及其用途

权利要求书

1.拟茎点霉属内生真菌，其特征是：菌株ZJWCF252，保藏名称为：Phomopsis wenchengensis，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期：2010年11月01日，保藏号：CGMCC NO.4301，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。

2.如权利要求1所述的拟茎点霉属内生真菌的用途，其特征是：用于制备2,3-dihydro-2-hydroxy-2,4-dimethyl-5-trans-propenylfuran-3-one。

3.一种2,3-dihydro-2-hydroxy-2,4-dimethyl-5-trans-propenylfuran-3-one的制备方法，其特征是依次包括以下步骤：

1）、将菌株ZJWCF252在PDA培养基上进行活化；

2）、将活化后所得的ZJWCF252菌饼接入pH 3~8的液体种子培养基中，于50~300 rpm的转速进行培养；培养温度为10~35℃，培养时间为2~10 d；得种子培养液；

3）、将种子培养液按照重量比为1~20%的接种量接入pH 3~8的液体发酵培养基中，于50~300 rpm的转速进行培养；培养温度为20~30℃，培养时间为1~12d，得发酵液；所述发酵液中含有2,3-dihydro-2-hydroxy-2,4-dimethyl-5-trans-propenylfuran-3-one。

4.根据权利要求3所述的2,3-dihydro-2-hydroxy-2,4-dimethyl-5-trans-propenylfuran-3-one的制备方法，其特征是：

所述步骤1）的活化条件为：将将菌株ZJWCF252转接在PDA培养基平板上，置于25~28℃的培养箱中培养7~10天。

5.根据权利要求4所述的2,3-dihydro-2-hydroxy-2,4-dimethyl-5-trans-propenylfuran-3-one的制备方法，其特征是：

所述步骤2）中的液体种子培养基为马铃薯葡萄糖培养液、MID改订培养液、淀粉酵母培养液或蔗糖酵母培养液；

所述步骤3）中的液体发酵培养基为硫酸铵、硝酸钙、硫酸镁、磷酸二氢钾、氯化钾、硫酸锌、硫酸锰、氯化铁、硼酸、碘化钾、酵母提取物、淀粉、葡萄糖和土豆汁的组合物。

6.根据权利要求3、4或5所述2,3-dihydro-2-hydroxy-2, 4-dimethyl-5-trans-propenylfuran-

3-one的制备方法，其特征是：

、将ZJWCF252的发酵液经压滤后收集滤液，所述滤液用0.6~3倍体积的溶剂进行提取，分离水相和有机相；有机相先用无水硫酸钠干燥，过滤，将所收集的有机相减压蒸馏，得褐色的粗提物浸膏；

、将所述粗提物浸膏进行硅胶柱层析分离，将粗提物浸膏与3~5质量倍的硅胶拌样，减压抽去溶剂，得硅胶拌均后样品；

称取粗提物浸膏50~100质量倍的200~300目柱层析硅胶装入玻璃层析柱，然后将硅胶拌均后样品装入层析柱，按极性从小到大的顺序，用石油醚/乙酸乙酯=7/3～3/7体积比的阶梯配比的溶剂系统进行洗脱，收集洗脱液，通过薄层层析检测，将斑点位置相同的洗脱液收集到一起，减压浓缩；然后用滤纸片法跟踪测试各组分对指示菌的抑制活性，得对终极腐霉具有抑菌活性的粗分样品；

、将上述步骤所得的对终极腐霉具有抑菌活性的粗分样品进行硅胶柱纯化细分，得细分样品；

、将上述步骤所得的细分样品通过凝胶柱层析分离，得目标化合物2,3-dihydro-2-hydroxy-2,4-dimethyl-5-trans-propenylfuran-3-one。