[发明专利]用作非病毒基因载体材料的谷胱甘肽修饰壳聚糖共聚物及其制备和应用

权利要求书

1.一种用作非病毒基因载体材料的谷胱甘肽修饰壳聚糖共聚物，其特征是，该共聚物主要由烯丙基化壳聚糖、亲水性的刷状聚乙二醇大分子链以及谷胱甘肽组成，其结构示意如图1所示。

2.如权利要求1所述的用作非病毒基因载体材料的谷胱甘肽修饰壳聚糖共聚物，其特征是，所述的壳聚糖分子量为3-100千道尔顿，脱乙酰度不低于90％。

3.如权利要求1所述的用作非病毒基因载体材料的谷胱甘肽修饰壳聚糖共聚物，其特征是，所述的亲水性的刷状聚乙二醇大分子链是由聚乙二醇分子量为200-10000的(甲基)丙烯酸酯单体MPEG通过可控自由基聚合成分子量为3-100千道尔顿含有端羧基的刷状亲水活性大分子链。

4.如权利要求3所述的用作非病毒基因载体材料的谷胱甘肽修饰壳聚糖共聚物，其特征是，所述的刷状亲水活性大分子链是以4，4’-偶氮4-氰基戊酸ACVA为引发剂以及4-氰基戊酸-二硫代苯酯为链转移剂CPADB制得。

5.如权利要求1所述的用作非病毒基因载体材料的谷胱甘肽修饰壳聚糖共聚物，其特征是，所述的谷胱甘肽是指还原态的谷胱甘肽。

6.一种制备权利要求1所述的用作非病毒基因载体材料的谷胱甘肽修饰壳聚糖共聚物的方法，其特征是，包括如下步骤：

1)壳聚糖经烯丙基化得烯丙基化壳聚糖衍生物；

2)以RAFT可控自由基聚合制得活性亲水性聚合物PMPEG；

3)利用自由基偶联法制备PMPEG接枝壳聚糖共聚物，CS-PMPEG；

4)谷胱甘肽经用EDC和NHS活化法连接到PMPEG接枝壳聚糖共聚物的PMPEG链端，得谷胱甘肽接枝共聚物，CS-PMPEG-GSH。

7.一种权利要求1所述的用作非病毒基因载体材料的谷胱甘肽修饰壳聚糖共聚物的应用方法，其特征是，用作非病毒基因载体材料。

8.如权利要求7所述的用作非病毒基因载体材料的谷胱甘肽修饰壳聚糖共聚物的应用方法，其特征是，用作非病毒基因载体材料所进行的共聚物CS-PMPEG-GSH的细胞转染方法，其步骤为：

1)CS-PMPEG-GSH/DNA复合物的制备：将聚合物溶于乙酸钠溶液中，配制成CS-PMPEG-GSH溶液，然后将配置好的经绿色荧光蛋白标记的DNA溶液，等体积加入到聚合物溶液，混合后，室温静置30分钟，然后静置得到CS-PMPEG-GSH/DNA复合物溶液；

2)体外细胞转染实验：

将NIH3T3细胞在培养板上培育，然后加入谷胱甘肽接枝壳聚糖共聚物CS-PMPEG-GSH/DNA复合物，培育完成后，用流式细胞仪定量测定转染效率。

9.如权利要求8所述的用作非病毒基因载体材料的谷胱甘肽修饰壳聚糖共聚物的应用方法，其特征是，所述的DNA是质粒DNA。