[发明专利]重组荧光双杂交酵母及其检测方法与应用

权利要求书

1.一种融合基因，由序列表中序列5第9到1030位核苷酸所示的DNA片段、报告基因、终止子、筛选标记蛋白表达盒和序列表中序列5第4336到5226位核苷酸所示的DNA片段依次连接构成的融合基因。

2.根据权利要求1所述的融合基因，其特征在于：

所述终止子的核苷酸序列为序列表中序列5第2803到3130位所示；

所述报告基因为荧光素酶报告基因；

所述筛选标记蛋白表达盒为HIS Box表达盒。

3.根据权利要求1或2所述的融合基因，其特征在于：

所述荧光素酶报告基因的核苷酸序列如序列表中序列5第1063位-第2715位所示；

所述HIS Box表达盒的核苷酸序列为序列表中序列5第3152到4329位所示。

4.根据权利要求1-3中任一所述的融合基因，其特征在于：所述融合基因为序列表中序列5第9到5226位所示的DNA分子。

5.含有权利要求1-4中任一所述融合基因的重组质粒。

6.一种重组酵母菌，是将权利要求1-5中任一所述融合基因导入宿主酵母菌得到的；所述宿主酵母菌为缺失GAL4基因和GAL80基因的酵母菌。

7.根据权利要求6所述的重组酵母菌，其特征在于：所述宿主酵母菌为酵母菌Y187。

8.检测权利要求6或7所述的重组酵母菌中荧光素酶活性的方法，包括以下步骤：

(1)使权利要求6或7所述的重组酵母菌中荧光素酶表达，得到荧光素酶表达的重组酵母菌；

(2)将步骤(1)得到的所述重组酵母菌进行震荡培养，至菌液的OD₆₀₀值为0.4-1.5或0.4或1.0或1.5，得到的菌液为待测菌液；培养容器内的所有物质记作菌液；

(3)将荧光素酶底物溶解于柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液中得到荧光素酶底物溶液，将得到的荧光素酶底物溶液与所述待测菌液混合，得到混合物，检测混合物的荧光值，即得到所述荧光素酶活性。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：

所述震荡培养是在温度为30℃和转速为200rpm的条件下进行，旋转半径为1.3cm；

所述待测菌液与所述荧光素酶底物溶液的体积比为1∶2-2∶1或1∶2或1∶1或2∶1；

所述荧光素酶底物溶液的浓度为0.01mM；

所述荧光素酶底物为D-荧光素；

所述柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液的浓度为0.1mol/L和pH值为3.0。

10.权利要求6或7所述的重组酵母菌在检测蛋白质间相互作用中的应用。