[发明专利]一种中性龙眼多糖级分的分离方法

权利要求书

1.一种中性龙眼多糖级分的分离方法，其特征是含以下步骤：

(1)选取龙眼果肉水提取物，将龙眼果肉水提取物经D301-F阴离子交换树脂除去大部分蛋白质和色素得到龙眼粗多糖；

(2)将龙眼粗多糖采用DEAE-52纤维素离子交换层析柱分离纯化，以去离子水洗脱，收集龙眼多糖洗脱液，浓缩和真空冷冻干燥得中性龙眼多糖粉末；

(3)将中性龙眼多糖经SephadexG-100凝胶渗透层析柱，以去离子水洗脱，收集不同龙眼多糖级分洗脱液，浓缩和真空冷冻干燥得中性龙眼多糖级分。

2.根据权利要求1所述的中性龙眼多糖级分的分离方法，其特征是：步骤(1)中所述的龙眼果肉水提物通过如下步骤制备获得：选择新鲜龙眼原料，烘干，除去皮及核，粉碎，得龙眼果肉；在龙眼果肉中加入30-40倍重量的水，加热至70-80℃，置于200-300W的超声波强度下浸提30-50min，取消超声继续浸提100-120min；浸提液经过滤与果肉残渣分离后，将滤液于60-70℃下真空浓缩至微粘稠状，收集浓缩液真空冷冻干燥即得龙眼果肉水提物。

3.根据权利要求1所述的中性龙眼多糖级分的分离方法，其特征是：步骤(1)中所述的龙眼粗多糖的具体制备过程是：在龙眼果肉水提物中加入水和D301-F阴离子交换树脂，调节溶液pH值、温度及振荡器的转速，振荡后，过滤收集龙眼粗多糖溶液，再经真空浓缩和真空冷冻干燥得龙眼粗多糖。

4.根据权利要求3所述的中性龙眼多糖级分的分离方法，其特征是：龙眼粗多糖制备过程中的各项参数为：水的用量为龙眼果肉水提取物总重量的20-30倍，D301-F阴离子交换树脂的用量为龙眼果肉水提取物总重量的3-4倍，调节溶液的pH值为5.0-6.0，温度为45-55℃，振荡器的转速100-120r/min振荡2-3h，分离溶液于55-65℃下真空浓缩至微粘稠状，收集浓缩液真空冷冻干燥即得龙眼粗多糖。

5.根据权利要求1所述的中性龙眼多糖级分的分离方法，其特征是：步骤(1)中所述的D301-F阴离子交换树脂需经预处理，预处理过程是：将D301-F填料经水浸泡，除去上层悬浮颗粒和杂质；用重量百分含量为4-5％的NaCl溶液浸泡3-4h后水洗；用重量百分含量为4-5％的NaOH溶液浸泡3-4h，水洗至近中性，50-55℃烘干备用。

6.根据权利要求1所述的中性龙眼多糖级分的分离方法，其特征是：步骤(2)中DEAE-52纤维素离子交换层析柱分离中性龙眼多糖的条件为：所述的DEAE-52纤维素离子交换层析柱的有效柱体积为30-210mL，DEAE-52纤维素离子交换层析柱的有效交换容积即多糖/有效柱体积为1.0mg/mL；DEAE-52纤维素离子交换层析柱有效柱体积与进样溶液体积比值为6.0-8.0∶1；去离子水清洗体积与DEAE-52纤维素离子交换层析柱所述DEAE-52纤维素离子交换层析柱有效柱体积比为2-3∶1；洗脱液流速与有效柱体积的比值为1∶3-4。

7.根据权利要求1所述的中性龙眼多糖级分的分离方法，其特征是：步骤(2)中所述的DEAE-52纤维素层析柱需经预处理，预处理过程是：DEAE-52填料经去离子水浸泡，除去上层悬浮颗粒和杂质；用0.4-0.5mol/L NaOH溶液浸泡30-40min，水洗至近中性；用0.4-0.5mol/L HCl溶液浸泡30-40min，水洗至近中性；用0.4-0.5mol/LNaOH溶液浸泡30-40min，水洗至近中性，采用湿法装柱即得OH-型的DEAE-52纤维素层析柱。

8.根据权利要求1所述的中性龙眼多糖级分的制备方法，其特征是：步骤(3)中所述的SephadexG-100凝胶渗透层析柱分离龙眼多糖级分的条件为：选取的SephadexG-100凝胶渗透层析柱的有效柱体积30-100mL；多糖的进样浓度为2-8mg/mL；SephadexG-100凝胶渗透层析柱的有效柱体积与进样溶液体积比值为20-30∶1；去离子水洗脱流速与有效柱体积的比值为3-4∶1。

9.根据权利要求1所述的中性龙眼多糖级分的制备方法，其特征是：步骤(3)中所述的SephadexG-100凝胶渗透层析柱需经预处理，所述的预处理过程是：将SephadexG-100填料经去离子水浸泡，除去上层悬浮颗粒和杂质，并以沸水处理25-35min，采用湿法装柱即得SephadexG-100凝胶层析柱。

10.根据权利要求1所述的中性龙眼多糖级分的制备方法，其特征是：步骤(2)中将龙眼多糖洗脱液在55-65℃下真空浓缩至微粘稠状，收集浓缩液真空冷冻干燥即得粉末状龙眼多糖；步骤(3)中将龙眼多糖级分洗脱液在55-65℃下真空浓缩至微粘稠状，收集浓缩液真空冷冻干燥即制备得中性龙眼蛋白多糖级分。