[发明专利]一种中性龙眼多糖级分的分离方法

说明书

技术领域

本发明属于农产品加工技术领域，具体涉及一种中性龙眼多糖级分的分离方法。

背景技术

龙眼主要分布于我国的广东、广西、福建和台湾等地，是典型的亚热带经济作物。龙眼是国家卫生部公布的药食两用植物，《本草纲目》中记载有“资益以龙眼为良”，并指出龙眼肉有“开胃健脾，补虚益智”的功效。且龙眼果肉在民间常用于治疗心血不足、心悸怔忡、失眠健忘、贫血、脾虚泄泻等症状。

目前，龙眼多糖的分离制备方法主要为水提醇沉，一般可以通过Sevag法、透析和醇沉等技术去除龙眼果肉水提液中的蛋白质和色素等杂质，但还是很难达到较高的纯度。如贾琦等分离得到的龙眼多糖中总糖含量为64.4％，凌雪萍等分离得到的龙眼多糖纯度也只达到80.96％。离子交换层析能有效分离粗多糖中的中性组分和酸性组分，再经凝胶过滤层析可实现不同分子量的多糖单体分离。杨翠娴等证实微波前处理-热水浸提的龙眼多糖是酸性杂多糖，贾琦等结合DEAE-纤维素和SephacrylS-300柱层析法得到一种酸性龙眼多糖均一组分。但关于龙眼多糖中性组分的分离纯化还鲜见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种中性龙眼多糖级分的分离方法，通过该方法可以得到单一组分的中性龙眼多糖。

本发明的上述目的可以通过如下技术方案来实现：一种中性龙眼多糖级分的分离方法，含以下步骤：

(1)选取龙眼果肉水提取物，将龙眼果肉水提取物经D301-F阴离子交换树脂除去大部分蛋白质和色素得到龙眼粗多糖；

(2)将龙眼粗多糖采用DEAE-52纤维素离子交换层析柱分离纯化，以去离子水洗脱，收集龙眼多糖洗脱液，浓缩和真空冷冻干燥得中性龙眼多糖粉末；

(3)将中性龙眼多糖经SephadexG-100凝胶渗透层析柱，以去离子水洗脱，收集不同龙眼多糖级分洗脱液，浓缩和真空冷冻干燥得中性龙眼多糖级分。

在上述步骤中：

步骤(1)中所述的龙眼果肉水提物通过如下步骤制备获得：选择新鲜龙眼原料，烘干，除去皮及核，粉碎，得龙眼果肉；在龙眼果肉中加入30-40倍重量的水，加热至70-80℃，置于200-300W的超声波强度下浸提30-50min，取消超声继续浸提100-120min；浸提液经过滤与果肉残渣分离后，将滤液于60-70℃下真空浓缩至微粘稠状，收集浓缩液真空冷冻干燥即得龙眼果肉水提物。

步骤(1)中所述的龙眼粗多糖的具体制备过程是：在龙眼果肉水提物中加入水和D301-F阴离子交换树脂，调节溶液pH值、温度及振荡器的转速，振荡后，过滤收集龙眼粗多糖溶液，再经真空浓缩和真空冷冻干燥得龙眼粗多糖。

步骤(1)中龙眼粗多糖制备过程中的各项参数为：水的用量为龙眼果肉提取物的20-30倍，D301-F阴离子交换树脂的用量为龙眼果肉水提取物的3-4倍，调节溶液pH值为5.0-6.0，温度为45-55℃，调节振荡器转速为100-120r/min振荡2-3h。分离溶液于55-65℃下真空浓缩至微粘稠状，收集浓缩液真空冷冻干燥即得龙眼粗多糖。

步骤(1)中所述的D301-F阴离子交换树脂需经预处理，预处理过程为：先经水浸泡，倒去上层悬浮颗粒和杂质，再用重量百分含量为4-5％的NaCl溶液浸泡3-4h后水洗；接着用重量百分含量为4-5％的NaOH溶液浸泡3-4h，水洗至近中性pH值，最后50-55℃烘干备用。

步骤(2)中DEAE-52纤维素离子交换层析柱分离纯化的条件为：所述DEAE-52纤维素离子交换层析柱的有效柱体积为30-210mL，所述DEAE-52纤维素离子交换层析柱有效交换容积即多糖/有效柱体积约为1.0mg/mL；所述DEAE-52纤维素离子交换层析柱的有效柱体积与进样溶液体积比值为6.0-8.0∶1；去离子水清洗体积与DEAE-52纤维素离子交换层析柱所述DEAE-52纤维素离子交换层析柱有效柱体积比为2-3∶1；洗脱液流速(mL/min)与有效柱体积(L)的比值为1∶3-4。

步骤(2)中所述的DEAE-52纤维素离子交换层析柱需经预处理，所述的预处理过程是：DEAE-52填料经去离子水浸泡，倒去上层悬浮颗粒和杂质；用0.4-0.5mol/L NaOH溶液浸泡30-40min，水洗至近中性pH值；用0.4-0.5mol/L HCl溶液浸泡30-40min，水洗至近中性pH值；用0.4-0.5mol/LNaOH溶液浸泡30-40min，水洗至近中性pH值，采用湿法装柱即得OH^-型层析柱。