[发明专利]总RNA提取方法

权利要求书

1.一种总RNA提取方法，其特征在于：步骤为：

（1）取新鲜植物材料在液氮环境下充分研磨成细粉状，快速转移到含有细胞裂解液的离心管中，震荡5-15秒后室温放置3-7分钟；

（2）向步骤（1）中的离心管中加1/3细胞裂解液体积的蛋白质-DNA沉淀溶液，上下颠倒混匀，4℃放置5-15分钟后，离心5-15分钟；

（3）转移上清液到新的离心管中，加等体积异丙醇，上下颠倒离心管混匀，室温放置5-15分钟，离心5-15分钟；

（4）弃上清液，用体积浓度70%-80%乙醇洗涤沉淀，室温空气干燥3-5分钟，加DEPC水稀释的DNA酶I溶液，37℃水浴10-20分钟；

（5）加DEPC水和盐酸胍溶液，上下颠倒混匀，离心3-7分钟；

（6）转上清液到新的离心管，加沉淀浓度为1.5-2.5mol/L的LiCl溶液，上下颠倒混匀，-20℃静置20-40分钟或4℃静置10-12小时；

（7）离心20-40分钟，用体积浓度70%-80%乙醇洗涤沉淀，室温空气干燥3-5分钟，溶解在DEPC水中低温保存。

2.如权利要求1所述的总RNA提取方法，其特征在于：所述的离心最大转速为14000rpm。

3.如权利要求1所述的总RNA提取方法，其特征在于：所述的细胞裂解液为2% (w/v)的SDS 、68 mmol/L的柠檬酸钠、132 mmol/L的柠檬酸、1mmol/L的EDTA和0.5 g/L的三盐酸亚精胺。

4.如权利要求1所述的总RNA提取方法，其特征在于：所述的蛋白质-DNA沉淀溶液为4 mol/L的 NaCl 、16 mmol/L 的柠檬酸钠和32 mmol/L 的柠檬酸。

5.如权利要求1 所述的总RNA提取方法，其特征在于：所述的LiCl溶液为8mol/L。

6.如权利要求1 所述的总RNA提取方法，其特征在于：所述的DEPC水稀释的DNA酶I溶液的浓度为0.5 units/μl。

7.如权利要求1 所述的总RNA提取方法，其特征在于：步骤（1）中，取新鲜植物材料在液氮环境下充分研磨成细粉状，快速转移到含有细胞裂解液的离心管中，震荡10秒后室温放置5分钟；步骤（2）中，向步骤（1）中的离心管中加1/3细胞裂解液体积的蛋白质-DNA沉淀溶液，上下颠倒混匀， 4℃放置10分钟，离心10分钟；步骤（3）中，转移上清液到新的离心管中，加等体积异丙醇，上下颠倒离心管混匀，室温放置10分钟后，离心10分钟；步骤（4）中，弃上清液，用体积浓度为75%乙醇洗涤沉淀，室温空气干燥3分钟，加DEPC水稀释的DNA酶Ⅰ溶液，37℃水浴15分钟；步骤（5）中，加DEPC水和盐酸胍，上下颠倒混匀，离心5分钟；步骤（6）中，转上清液到新的离心管，加沉淀浓度为1.5-2.5mol/L的LiCl溶液，混匀，-20℃静置30分钟或4℃静置10小时；步骤（7）中，离心30分钟，用体积浓度75%乙醇洗涤，空气干燥3分钟，溶解在DEPC水中-80℃保存。