[发明专利]从竹叶中制备高纯度苜蓿素的方法

说明书

技术领域

本发明属于天然产物化学领域，涉及一种天然产物苜蓿素的制备方法，特别涉及一种从竹叶中制备天然产物苜蓿素的方法，更特别涉及一种从竹叶中制备高纯度天然产物苜蓿素的方法。本发明还涉及由本发明方法获得的苜蓿素，以及苜蓿素在制备抗肿瘤药物中的用途。

背景技术

苜蓿素(tricin)又称小麦黄素、麦黄酮。苜蓿素为黄色针状结晶(醋酸-水)，黄色粉末(氯仿-甲醇)，熔点291-292℃。苜蓿素存在于禾本科植物芒(Miscanthus sinensis Anderss.)的茎、叶中，豆科植物紫苜蓿(Medicago sativa L.)，菊科植物等植物中。苜蓿素对离体豚鼠肠管有松弛作用，有轻度抗氧化作用，可防止肾上腺素氧化，并有轻度雌激素样作用。可用作染料中间体。

目前，市场上售苜蓿素相关产品大多从紫苜蓿中制备而来，且资源有限，工艺复杂、成本高、产品纯度低，售价高。

尽管我国竹叶资源丰富，但我国竹叶资源在大部分竹产区被弃用，所以，如何充分利用我国丰富的竹叶资源，开发出高附加值的竹叶化学成分产品是当前科研工作者研究热点之一。

竹叶作为一种“药食两用的天然植物”已被广大消费者所接受，竹叶提取物主要功能性成分为竹叶黄酮糖苷，具有抗氧化和抑菌活性，可以作为一种生物黄酮类保健营养素进行开发，前景广阔。目前，以竹叶为原料，利用硅胶柱层析、大孔树脂柱层析、有机溶剂液液萃取等方法制备的竹叶黄酮粉产品已经上市，而且把竹叶黄酮粉在食品、保健品、化妆品、药物等领域的开发应用也很多，但很少有分离制备黄酮单体纯品，应用于抗肿瘤药物，且大部分产品生产工艺复杂、成本高、产品的总黄酮含量大多在40％以下，并且黄酮得率低，这直接导致了产品售价较高。虽然从竹叶这种资源广泛的材料中提取各种类型的黄酮已有许多文献报道，但从竹叶或其粗制提取物中制备高纯度苜蓿素尚未见有报道。

因此，寻找一种从竹叶中高效率制备高纯度天然产物苜蓿素的方法，填补市场空白，仍是本领域技术人员为之努力的方向。

发明内容

本发明的目的是为制备高纯度苜蓿素而提供一种简便的从竹叶中提取高纯度苜蓿素的方法。本发明人令人意外地发现，通过对竹叶粗提，然后进行酸解，再进一步进行C₁₈柱层析分离，最后通过凝胶分离纯化，可以获得纯度在99％以上的苜蓿素纯品。本发明基于上述发现而得以完成。

发明概述

为此，本发明第一方面提供了一种从竹叶中制备高纯度苜蓿素的方法，其包括以下步骤：(a)使干燥竹叶用95％乙醇提取，用石油醚萃取，水相浓缩成浸膏；(b)使浸膏上AB-8大孔树脂柱，先用纯水洗脱，再用80％乙醇洗脱，将洗脱液浓缩并干燥；(c)向步骤(b)干燥产物中加入盐酸甲醇溶液，加热进行酸解处理；(d)使步骤(c)所得酸解液上C₁₈柱层析洗脱，收集苜蓿素级分，浓缩；(e)使步骤(d)所得浓缩物上凝胶分离柱，用纯甲醇作流动相洗脱，收集苜蓿素级分，浓缩到干燥，即得苜蓿素。

本发明第二方面提供一种竹叶提取物，其中包含纯度大于95wt％的苜蓿素。

本发明第三方面提供苜蓿素或包含苜蓿素的提取物在制备抗肿瘤的药物中的用途。

发明详述

本发明第一方面提供了一种从竹叶中制备高纯度苜蓿素的方法，其包括以下步骤：

(a)使干燥竹叶用95％乙醇在60℃回流提取三次，将合并的提取液浓缩至无醇味，再用石油醚萃取，水相浓缩成浸膏；

(b)使浸膏用少量95％乙醇溶解后上AB-8大孔树脂柱，先用纯水洗脱，再用80％乙醇洗脱，将洗脱液浓缩并干燥；

(c)向步骤(b)干燥产物中加入盐酸甲醇溶液，加热进行酸解处理，处理完毕后用用稀NaOH溶液中和；

(d)使步骤(c)所得酸解液与样品同等重量的C₁₈填料混合，浓缩拌样干燥，再使干燥的C₁₈填料拌样固体上样，按1∶10的样品和填料比例上C₁₈柱层析，先用20％甲醇水溶液洗脱，再用60％甲醇水溶液洗脱，收集苜蓿素级分，浓缩；

(e)使步骤(d)所得浓缩物用甲醇溶解，按1∶10的样品和填料比例，上凝胶分离柱，用纯甲醇作流动相洗脱，收集苜蓿素级分，浓缩到干燥，即得苜蓿素。

在本发明第一方面所述方法的一个实施方案中，其中在步骤(a)中，所述三次回流提取的料液比分别是1/10、1/8、1/5，回流提取时间分别为3h、2h、2h。