[发明专利]一种格列苯脲、格列齐特和格列吡嗪三联检测卡及其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测中药中非法添加西药成分的器具，特别涉及一种格列苯脲、格列齐特和格列吡嗪三联检测卡及其检测方法，属于中药非法添加西药成分检测技术领域。

背景技术

糖尿病降糖中药或保健品中最常非法添加的降糖西药成分是格列苯脲、格列齐特和格列吡嗪。据五个省市对市面上销售的32种宣称具有降糖作用中药及中药保健品进行的抽样化验检查发现，70%的药物中都添加有降糖西药成分。如果患者在不知情的情况下，私自服用过量号称纯中药的药物，就会出现病情加重或恶化的情况。例如格列苯脲的降糖作用为甲苯磺丁脲的100～200倍，治疗量范围大，降糖作用强，半减期12～14小时，维持时间长，易引起低血糖昏迷，特别是老年人。低血糖昏迷如持续6小时以上引起大脑功能损害可能是不可逆的，主要是神经元广泛变性、坏死，大小神经胶质细胞浸润。神经系统中大脑皮质、海马回，小脑、尾状核，苍白球处低血糖最为明显。

目前，检测中药中非法添加西药成分的主要方法有高效液相色谱法及液质联用等进行定性和定量的分析。这些方法对实验仪器设备要求高，操作繁琐，对操作人员的专业知识要求高，费时费力。因此建立一种准确可靠又快速方便的检测中药中西药成分的分析方法是非常必要的。

发明内容

本发明的目的在于提供一种操作简便快捷、成本低、携带方便、非专业人员也能操作及可进行现场检测的胶体金试纸，且能同时检测三类西药降糖成分，克服现有技术操作繁琐、专业要求高的缺陷。

本发明的技术方案：一种格列苯脲、格列齐特和格列吡嗪三联检测卡，在长条扁平薄壳状的检测卡外壳1中设置测试条2，检测卡外壳表面有检测窗孔3和加样孔4，测试条2是由支承背板5上通过不干胶在其上依次粘贴样品垫8、胶体金膜7、14、15、硝酸纤维素膜6和吸水膜9所组成；支承背板中部叠置粘贴硝酸纤维素膜6，支承背板一端叠置粘贴吸水膜9，另一端叠置粘贴样品垫8，吸水膜内端与样品垫内端各自分别与硝酸纤维素膜搭接，在样品垫与硝酸纤维素膜的搭接部，两者之间夹置粘贴数段胶体金膜7、14、15；胶体金膜依次为含抗格列苯脲抗体、抗格列齐特抗体、抗格列吡嗪抗体的胶体金标记物的玻璃纤维膜，硝酸纤维素膜上有三条检测带和一条质控带，依次是：含格列苯脲蛋白质偶联物检测带10，含格列齐特蛋白质偶联物检测带11，含格列吡嗪蛋白质偶联物检测带12，含抗兔抗体或抗鼠抗体的质控带13；测试条置入检测卡外壳内，样品垫正对加样孔，硝酸纤维素膜正对检测窗孔。

应用免疫学的方法直接检测样品中格列苯脲、格列齐特和格列吡嗪的含量，检测样品为胶囊、片剂或药丸降糖中药样品，处理方法如下：

（1）随机采集一定量的待测样本，粉碎均匀；

（2）称取5g粉碎后的样品，加入10mL样品抽提液，充分搅拌混合5min以上，震荡反应30min；

抽提液配置如下：在70mL甲醇中加入30mL蒸馏水；

（3）将步骤（2）所得溶液移入10mL离心管，4000r/min离心10min，取离心后的上清液；上清液澄清，按上清液︰样品稀释液为1︰3的比例稀释，即取上清液100μL加入300μL样品稀释液，混合均匀后测定；上清液浑浊，则用滤纸过滤，取过滤后的上清液，按上清液100μL加入300μL样品稀释液进行稀释，混合均匀后测定；

样品稀释液为pH7.6、10mmol PBST溶液。

如果显示检测带10、11、12和质控带13同时显现棕红色印迹，表示检测结果为阴性，说明被检测样品中格列苯脲、格列齐特和格列吡嗪含量没有超过允许值。

如果检测带10、11、12不显示颜色，只有质控带13显现棕红色印迹，检测结果为阳性，表明被检测样品中格列苯脲、格列齐特和格列吡嗪含量同时超过允许值。

如果检测带10、11不显示颜色，检测带12和质控带13同时显现棕红色印迹，检测结果为阳性，表明被检测样品中格列苯脲和格列齐特含量超过允许值，而格列吡嗪含量没有超过允许值。

如果检测带10、12不显示颜色，检测带11和质控带13同时显现棕红色印迹，检测结果为阳性，表明被检测样品中格列苯脲和格列吡嗪含量超过允许值，而格列齐特含量没有超过允许值。

如果检测带11、12不显示颜色，检测带10和质控带13同时显现棕红色印迹，检测结果为阳性，表明被检测样品中格列齐特和格列吡嗪含量超过允许值，而格列苯脲含量没有超过允许值。