[发明专利]一种喹啉生物碱的二聚物盐及其制备和应用

说明书

(一)技术领域

本发明涉及一种喹啉生物碱的二聚物盐及其制备方法和应用。

(二)背景技术

海洋中蕴藏着丰富的微生物资源，海洋的特殊复杂环境决定了海洋微生物特殊的代谢方式，代谢物化学结构具有极大的复杂性和多样性。海洋真菌是海洋微生物的重要组成类型，海洋真菌次级代谢产物研究从1988年陆续有文献报道，直到1992年，从海洋真菌中发现的新的化合物只有15个，在1994年之后有所增加。最近几年，随着全世界对海洋生物资源研究的不断深入，海洋真菌由于其资源优势和新颖的次生代谢产物，成为海洋天然产物的研究热点。海洋真菌能产生丰富的生物活性次级代谢产物，如萜类、肽类、生物碱类和酯类等，许多化合物因为具有一定的抗菌、细胞毒、抗氧化、抗肿瘤、抗滤过性病原体、酶抑制等活性，而成为药物研发的新资源。

本发明从海洋来源真菌Penicillium sp.CCTCC No：M2010088中分离得到天然化合物3-仲-丁基-4甲基-2，3-二氢-1H-吡咯并[3，4-b]喹啉-1，9(4H)-二酮二聚物盐，属于喹啉生物碱的二聚物盐类化合物，该化合物具有显著的抗肿瘤活性。

(三)发明内容

本发明的目的是提供一种喹啉生物碱的二聚物盐及其制备方法和应用。

本发明所述喹啉生物碱的二聚物盐为如式(I)所述的两个3-仲-丁基-4甲基-2，3-二氢-1H-吡咯并[3，4-b]喹啉-1，9(4H)-二酮配体与羟基氯化镁和水分子络合形成的二聚物盐：

本发明还涉及制备所述的喹啉生物碱的二聚物盐的方法，所述制备方法是将海洋来源真菌Penicillium sp.CCTCC No：M2010088经发酵培养所得菌体用甲醇浸提制得甲醇提取物，甲醇提取物再用200～300目柱层析硅胶进行柱层析分离，以体积比为10～0∶1的氯仿/甲醇为洗脱液进行梯度洗脱，这里体积比为0∶1的氯仿/甲醇为洗脱液的含意即只用甲醇为洗脱液，洗脱液的流速为1～10ml/min，每种浓度的洗脱液洗脱时间为30min～120min，将各浓度的洗脱液分别回收洗脱溶剂，再分别用硅胶GF₂₅₄板为薄层层析板，体积比为5∶1的氯仿/甲醇混合液为展开剂，以碘化铋钾生物碱为显色剂，进行薄层层析，收集所有R_f为0.5的流分合并，用甲醇进行重结晶，得到所述的喹啉生物碱的二聚物盐，即3-仲-丁基-4甲基-2，3-二氢-1H-吡咯并[3，4-b]喹啉-1，9(4H)-二酮的二聚物盐。上述海洋来源真菌CCTCC No：M2010088从中国东海北纬28.2690度、东经121.6047度海域的海水中分离得到，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国，武汉，武汉大学，430072，保藏日期：2010年4月19日，已作为新菌株予以保护。

优选的，本发明所述的喹啉生物碱的二聚物盐的制备方法，所述洗脱液的流速为1ml/min，所述每种浓度洗脱液的洗脱时间为30min，所述洗脱液的浓度变化为：氯仿/甲醇体积比为10∶1、氯仿/甲醇体积比为8∶1、氯仿/甲醇体积比为6∶1、氯仿/甲醇体积比为4∶1、氯仿/甲醇体积比为2∶1、甲醇。

所述发酵培养可在常规适用于海洋真菌的人工海水GYT培养基中进行，通常每20L人工海水GYT培养基在28℃，200rpm条件下摇床培养1个月得到的菌液能分离得湿菌体20g。所述人工海水GYT培养基每100ml组成为：葡萄糖1g，蛋白胨0.2g，酵母膏0.1g，琼脂2g，60ml人工海水，溶剂为40ml蒸馏水，初始pH为7.5。所述人工海水每100ml组成为：NaCl 2.448g，Na₂SO₄ 0.3917g，KCl 0.0664g，KBr0.0096g，SrCl₂ 0.0024g，MgCl·6H₂O 0.4981g，CaCl₂·H₂O 0.1102g，NaHCO₃ 0.0192g，H₃BO₃ 0.0026g，NaF 0.0004g，蒸馏水100ml。