[发明专利]用FQ-PCR检测嗜水气单胞菌的方法

权利要求书

1.一种用FQ-PCR检测嗜水气单胞菌的方法，先制备嗜水气单胞菌模板DNA，再进行扩增反应，即将准备好的扩增反应液加入模板DNA中，然后在PCR仪上进行扩增反应并获得数据供计算机进行计算，最后判断结果，其特征是所说扩增反应液中包括针对仅存于有毒力的嗜水气单胞菌菌株中的因子的上、下游引物，其中上游引物的DNA序列为5’-ACC GCA AGA TCA ACG ATA CCG AGT-3’，下游引物的DNA序列为5’-ATC CAG CGA GAT CCG CAC TAT CTT-3’。

2.如权利要求1所述的方法，其特征是所说扩增反应液中还包括TaqMan探针，该TaqMan探针的DNA序列为5’-（FAM）-AAC ATC TCG CTG GTT TAC CGG GTC AA-（TAMRA）-3’。

3.一种用FQ-PCR检测嗜水气单胞菌的方法，先制备嗜水气单胞菌模板DNA，再进行扩增反应，即将准备好的扩增反应液加入模板DNA中，然后在PCR仪上进行扩增反应并获得数据供计算机进行计算，最后判断结果，其特征是所说扩增反应液中包括针对仅存于有毒力的嗜水气单胞菌菌株中的因子的上、下游引物，其中上游引物的DNA序列为5’-ACC CAG GAC GGT GCG ATA TAA GAT-3’，下游引物的DNA序列为5’-TCT CAC TTG CCT GAA CTG AAG CGA -3’。

4.如权利要求3所述的方法，其特征是所说扩增反应液中还包括TaqMan探针，该TaqMan探针的DNA序列为5’-（FAM）-AAC ATC GTT AGC GTT GGC AAT CTC GG-（TAMRA）-3’。

5.一种用FQ-PCR检测嗜水气单胞菌的方法，先制备嗜水气单胞菌模板DNA，再进行扩增反应，即将准备好的扩增反应液加入模板DNA中，然后在PCR仪上进行扩增反应并获得数据供计算机进行计算，最后判断结果，其特征是整个步骤以平行的两组实验同时进行，其中之一所说扩增反应液中包括DNA序列为5’-ACC GCA AGA TCA ACG ATA CCG AGT-3’的上游引物，DNA序列为5’-ATC CAG CGA GAT CCG CAC TAT CTT-3’的下游引物，DNA序列为5’-（FAM）-AAC ATC TCG CTG GTT TAC CGG GTC AA-（TAMRA）-3’的TaqMan探针；其中之二所说扩增反应液中包括DNA序列为5’-ACC CAG GAC GGT GCG ATA TAA GAT-3’ 的上游引物，DNA序列为5’-TCT CAC TTG CCT GAA CTG AAG CGA -3’ 的下游引物，DNA序列为5’-（FAM）-AAC ATC GTT AGC GTT GGC AAT CTC GG-（TAMRA）-3’的TaqMan探针。

6.如权利要求1或2或3或4或5所述的方法，其特征是应用了以下试剂盒：该试剂盒，试剂盒所装试剂中有：

2x Premix EX Taq反应液：由Taq 酶、buffer、dNTP Mixture、Mg²⁺混合而成；

上游引物；

下游引物；

TaqMan探针。

7.如权利要求6所述的方法，其特征是所说试剂盒中下述试剂的包装量为其一次实验量的相同倍数：

2x Premix EX Taq反应液一次实验量为10μl；

上、下游引物的浓度为5 μM，一次实验量为0.4μl；

TaqMan探针的浓度为2.5μM ，一次实验量为0.4μl。

8.如权利要求6所述的方法，其特征是所说试剂盒中所包装的试剂中，上、下游引物及TaqMan探针有甲乙两组中的一组或两组，其中甲组是：DNA序列为5’-ACC GCA AGA TCA ACG ATA CCG AGT-3’的上游引物，DNA序列为5’-ATC CAG CGA GAT CCG CAC TAT CTT-3’的下游引物，DNA序列为5’-（FAM）-AAC ATC TCG CTG GTT TAC CGG GTC AA-（TAMRA）-3’的TaqMan探针；乙组是：DNA序列为5’-ACC CAG GAC GGT GCG ATA TAA GAT-3’ 的上游引物，DNA序列为5’-TCT CAC TTG CCT GAA CTG AAG CGA -3’ 的下游引物，DNA序列为5’-（FAM）-AAC ATC GTT AGC GTT GGC AAT CTC GG-（TAMRA）-3’的TaqMan探针；有两组时2x Premix EX Taq反应液的包装量是其他试剂反应量的两倍。