[发明专利]微波辅助酶解制备猪血活性肽的方法

说明书

技术领域

本发明属快速制备猪血活性肽的一种方法，属于畜禽副产品深加工及综合利用的技术领域。

背景技术

我国猪血资源丰富，但猪血在我国浪费现象严重。目前粗加工成血粉或者血豆腐，精深加工主要集中在生产血红素、SOD和补铁产品等。猪血中蛋白含量高，可生产加工活性肽产品。活性肽不仅具有营养功能和生物活性，而且还具有被肠道快速吸收的特点。目前工业生产的蛋白粉主要是采用酸碱法或酶解法，但是使用酸碱法会使氨基酸营养价值降低，而采用酶解法，酶解过程需要十多小时甚至更长时间。微波在焙烤、干燥、烫漂、解冻方面都有应用，在辅助酶解上的研究也越来越多。微波辅助酶解可大大缩短酶解时间，提高生产效率，便于工业化生产。

发明内容

本发明目的是提供一种微波辅助酶解猪血蛋白，生产活性肽的方法。该方法工艺简单，酶解反应时间短。所述方法包括：猪血抗凝，离心分离，超声波破壁，微波辅助酶解，二次酶解，灭酶，膜过滤，喷雾干燥。

1)检疫合格的新鲜猪血液加入0.3％-0.5％柠檬酸三钠抗凝；

2)猪血离心分离：离心使用高速冷冻离心机，离心温度1℃-4℃，离心转速2500rpm-4000rpm，离心时间15min-20min，离心后，血细胞加入同体积0.9％生理盐水冲洗1-3次；

3)超声波破胞：超声波功率为200w-400w，时间为10min-20min，间歇比采用2∶1、1∶1、1∶2，操作在常温下进行；

4)微波辅助酶解：微波辅助第一次酶解，微波功率在500w-700w，温度在45℃-60℃，酶解的时间为10min-20min，底物浓度为7％-10％，用1M的NaOH调节pH至8.0-10.0，再加入pH为8.0-10.0的磷酸盐缓冲液，加入酶活力为2.4AU-A/g的Alcalase内切酶，酶的添加量为底物的2％-7％；

5)二次酶解：在第一次酶解结束后，再加入酶活力为200000U/g食品级风味蛋白酶进行第二次酶解，加酶量为底物的2％，酶解1min-3min，微波功率和温度与第一次酶解相同，脱去苦味；

6)灭酶：在90℃-100℃水浴锅内灭酶，灭酶时间为5min-10m；

7)膜过滤：采用孔径为3000Da-10000Da的膜，对酶解液进行过滤，滤除大分子物质；

8)喷雾干燥：喷雾干燥料液流量6L/h-8L/h，料液温度75℃-85℃，进风口温度在120℃-140℃，出口风温度在70℃-85℃，喷雾干燥得到猪血活性肽粉末。

具体实施方式

实施例

1血细胞的分离

检疫合格的新鲜猪血加入0.33％柠檬酸三钠抗凝，缓慢搅拌。使用高速冷冻离心机分离血液，在4℃条件下，用3000rpm的转速离心15min，倒出上清液，加入等体积0.9％生理盐水再次离心，上述清洗步骤重复两次，得到较纯净的血细胞。

2超声波破壁

用超声波破除血细胞的细胞壁，调整功率为400w，间歇比2∶1，加两倍体积去离子水，超声波处理20min。破壁操作在常温下进行。用紫外-可见分光光度计测量上述溶液，吸光度从0.102上升到0.408，破壁效果显著。

3微波辅助酶解

微波辅助酶解采用分步酶解的方法。超声波破壁后的底物加入蒸馏水调成浓度7％的溶液，用1M的NaOH调节底物pH至9.0，再加入pH为9.0的磷酸盐缓冲液，添加酶活力为2.4AU-A/g的Alcalase内切酶，加酶量为底物的6％。将配好的酶解反应溶液倒入到微波反应仪，设定微波功率为500w，控制温度在50℃，酶解11min后，酶解效率能达到29.74％。再加入2％酶活力为200000U/g的食品级风味蛋白酶进行二次酶解，酶解2min，脱去苦味。在酶解反应完成后，用90℃水浴锅恒温10min灭酶。最后将酶解液用3000Da膜过滤，滤除大分子物质。用高效液相色谱分析滤液，80％以上是小于1000Da的活性肽。

4喷雾干燥

膜过滤后的酶解液进行喷雾干燥，料液流量为6.5L/h，料液温度为80℃，进风口温度为130℃，出风口温度为75℃，喷雾干燥得到猪血活性肽粉末。