[发明专利]一株高效固氮的紫云英根瘤菌及其培养方法与它的用途

权利要求书

1.一株高效固氮的紫云英根瘤菌(Rhizobium astragula)CGMCCNo.4347。

2.根据权利要求1所述紫云英根瘤菌CGMCC No.4347的培养方法，其特征在于该方法的步骤如下：

(1)菌种的活化：接种紫云英根瘤菌(Rhizobium astragula)CGMCC No.4347至斜面培养基，在温度28℃下培养72小时；

所述的斜面培养基组成如下：甘露醇10g/L、酵母膏1.0g/L、磷酸氢二钾0.5g/L、硫酸镁0.5g/L、氯化钠0.2g/L、琼脂18g/L，pH6.8～7.0；

(2)种子培养：将活化菌种转接至灭菌液体培养基中，在温度28℃与160～180rpm条件下摇床培养48小时；

所述的种子培养基组成如下：甘露醇10g/L、酵母膏1.0g/L、磷酸氢二钾0.5g/L、硫酸镁0.5g/L、氯化钠0.2g/L，pH6.8～7.0；

(3)发酵培养：以体积计按照1％接种量将步骤2)得到的种子液转接入发酵培养基中，在温度28℃与150rpm的条件下培养48小时，得到所述液体紫云英根瘤菌剂；

所述的发酵培养基组成如下：大豆糖蜜9g/L、甘露醇1g/L、酵母膏0.2g/L、谷氨酸钠0.8g/L、磷酸氢二钾0.5g/L、硫酸镁0.5g/L、氯化钠0.2g/L，pH6.8～7.0。

3.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于所得到的液体紫云英根瘤菌CGMCC No.4347菌剂活菌数达到125亿/ml以上。

4.一种固体紫云英根瘤菌CGMCC No.4347菌剂的生产方法，其特征在于根据权利要求2所述培养方法得到的液体紫云英根瘤菌CGMCC No.4347菌剂与经灭菌的pH值7.0～7.2的草炭按照重量份比1∶2～4混合，然后在温度28℃的条件下增殖培养12～36小时，得到活菌数大于5亿/g的固体紫云英根瘤菌CGMCC No.4347菌剂。 

5.根据权利要求4所述的方法所述的草炭为80～150目。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述的草炭在温度121℃下灭菌0.5-1.5小时。

7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于在温度28℃的条件下增殖培养20～28小时。

8.根据权利要求2-7中任一权利要求所述方法得到的紫云英根瘤菌菌剂在种植紫云英中的用途。

9.根据权利要求7所述的用途，其特征在于在种植紫云英时，按照每亩地为根据权利要求2所述方法制备的液体紫云英根瘤菌剂20～40ml与紫云英种子1.5～2.5kg的比例，将紫云英根瘤菌剂与紫云英种子混拌均匀，然后播种。

10.根据权利要求8所述的用途，其特征在于在种植紫云英时，按照每亩地为根据权利要求4所述方法制备的固体紫云英根瘤菌剂150～250g与紫云英种子1.5～2.5kg的比例，将紫云英根瘤菌剂与紫云英种子混拌均匀，然后播种。