[发明专利]一种肾功能不全治疗用的自体干细胞及其制备方法

权利要求书

1.一种肾功能不全治疗用的自体干细胞，其特征在于：所述的自体干细胞是从患者腹部或者臀部抽吸的脂肪组织中分离提纯、扩增培养的脂肪干细胞经诱导分化形成的自体内皮祖细胞。

2.如权利要求1所述的一种肾功能不全治疗用的自体干细胞，其特征在于：所述的自体干细胞的具体制备方法为：

a、在无菌条件下从患者腹部或者臀部抽吸脂肪组织，用PBS缓冲液反复冲洗3次去除红细胞和其它细胞碎片后，剪碎，加入2～3倍体积的含0.075%～0.1% I型胶原酶的PBS缓冲液，37℃水浴中充分振荡消化30min以上；

b、而后加入等量的含10%自体血清或人AB血清的DMEM培养液中和胶原酶，1000rpm离心10min，去除漂浮的脂肪细胞和上清液，获得的细胞沉淀加入140～180mM NH₄Cl的PBS缓冲液重新悬浮，室温静置10min裂解红细胞后，1000rpm离心10min弃去上清液，获得细胞沉淀；

c、获得的细胞沉淀经PBS缓冲液洗涤后，用含10%自体血清或人AB血清、100U/mL青霉素、100??g/mL链霉素的DMEM培养液重悬，以约10⁴/cm²密度接种至100mm培养皿中，在37℃、5%CO₂、饱和湿度为100%的培养箱中培养，48h后首次换液；待细胞生长至80%以上融合时，用0.25%胰酶/EDTA消化、按1:3的比例传代；

d、选取第2～4代的细胞，用0.25%胰酶/EDTA消化后，接种在含1～10ng/mL hrVEGF,0.05～0.2??mol/L atorvastatin和5%～20%患者自体血清或人AB血清的X-vivo-15培养液中，培养3～4d，诱导分化成肾功能不全治疗用的自体内皮祖细胞。

3.如权利要求2所述的一种肾功能不全治疗用自体干细胞的制备方法，其特征在于：选取第2~4代脂肪干细胞进行诱导分化成内皮祖细胞。