[发明专利]一种快速磁分离法主导的肝癌甲胎蛋白变异体检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于纳米材料应用领域，具体涉及一种快速磁分离法主导的肝癌甲胎蛋白变异体(AFP-L3)检测试剂盒。

背景技术

在世界范围内，乙肝病毒和丙肝病毒肝炎及肝硬化是肝细胞肝癌(HCC)的重要危险因素，90％以上的HCC患者被检出乙肝病毒。我国是肝癌高发国家，每年约11万患者死于HCC，这相当于整个世界死于HCC患者的45％。临床肝癌发现时多已晚期，治疗难度大，手术并发症多，疗效通常不好，生存期短，一般发病后生存时间仅为6个月到一年。所以，在肝癌防治中，早期发现、早期诊断和早期治疗就显得尤为重要。

甲胎蛋白(AFP)作为HCC的诊断及疗效随访观察指标已应用多年，由于AFP不够特异从而限制了HCC早期诊断的价值，但AFP对HCC可疑患者(指高危人群中)的筛选还是有效的。上世纪八十年代，上海市肿瘤研究所许凯黎研究员等最早采用扁豆凝集素(LCA)亲和放射免疫电泳方法，检测HCC病人血清中AFP-L3。发现良性肝病时肝细胞坏死后再生时产生的AFP糖链结构，与HCC时产生的AFP糖链结构上有明显差异。进一步研究发现AFP-L3在两支链复合型糖链的还原末端侧的N-乙酰葡萄糖胺上结合着α-1-6-岩藻聚糖，该糖链结构能特异性结合LCA。研究人员将AFP分为LCA非结合型：AFP-L1主要存在于良性肝病中、AFP-L2来自孕妇，LCA结合型：AFP-L3为HCC所特有，揭示了AFP-L3是HCC恶性程度的一个重要标志。在HCC的早期诊断中检测AFP-L3是非常有效的。据报道，AFP-L3在小肝癌(＜2cm)可以有35％的阳性率，AFP-L3比影像学检查可以提前9-12个月发现HCC的存在。对良性肝病特异性≥95％。AFP-L3的敏感性与HCC的临床分期相关：AFP-L3用于检测HCC的总的敏感性大约在60％左右之间。在直径小于2cm肝癌中，其敏感性只有35-45％。随着HCC的增大，AFP-L3的敏感性也随之升高。当HCC的直径≥5cm时，AFP-L3的敏感性可高达80-90％。AFP-L3阳性的HCC 存在早期血管浸润和肝内转移的倾向。如果α-连环蛋白缺失，那么HCC常常有肝外的转移。影像学研究发现AFP-L3阳性的HCC通常有丰富的肝动脉血液供给，肿瘤的倍增时间较短。这就提示了AFP-L3阳性的HCC生长的非常快并且容易发生早期转移。AFP-L3对肝癌的诊断具有很高的准确率。HCC的早期发现可以为患者提供更多的治疗机会，如肝癌治疗最有效的外科切除术，介入治疗等。

目前，我国政府正式将AFP-L3检测纳入医保项目，人们期待操作简便、快速、稳定性好、重复性好的AFP-L3检测方法。

发明内容

本发明旨在提供一种磁分离法主导的快速肝癌甲胎蛋白变异体(AFP-L3)检测试剂盒，

本发明还提供一种上述磁分离法主导的快速肝癌甲胎蛋白变异体(AFP-L3)检测试剂盒的制备方法。

本发明的另外一个目的是提供一种上述磁分离法主导的快速肝癌甲胎蛋白变异体(AFP-L3)检测试剂盒的用途。

本发明的磁分离法主导的快速肝癌甲胎蛋白变异体(AFP-L3)检测试剂盒含有如下的物质：含有凝集素修饰的磁珠作为固相载的缓冲液、清洗缓冲液和洗脱缓冲液。进一步的描述如下：一种磁分离法主导的快速肝癌甲胎蛋白变异体的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有如下物质：(1)一种含有0.5％-10％重量的凝集素修饰的磁珠作为固相载体的pH为7.1-7.9的缓冲液，其中凝集素修饰的磁珠和其上所含的凝集素的重量百分比为4-200∶1；所述的缓冲液含有25mM的三羟甲基氨基甲烷-盐酸(Tris-Hcl)、25mM的氯化钠(NaCl)、2mM的氯化镁(MgCl₂)和2mM的氯化钙(CaCl₂)的水溶液；(2)一种pH为7.1-7.9的清洗缓冲液，上述的清洗缓冲液含有50mM的Tris-Hcl、50mM的NaCl、2mM的MgCl₂和2mM的CaCl₂的水溶液；(3)和一种pH为6.5-7.0的洗脱缓冲液；上述的洗脱缓冲液含有0.25M的甲基-a-D-甘露糖(Ethyl-a-Mannopyranoside)、50mM的Tris-Hcl和0.5M的NaCl的水溶液。