[发明专利]一种全程定量检测肌钙蛋白I的免疫层析试纸条及其制备方法无效
申请号: | 201010619731.6 | 申请日: | 2010-12-31 |
公开(公告)号: | CN102087293A | 公开(公告)日: | 2011-06-08 |
发明(设计)人: | 王继华;周楠 | 申请(专利权)人: | 广州万孚生物技术有限公司 |
主分类号: | G01N33/68 | 分类号: | G01N33/68;G01N33/577;G01N33/558;G01N33/533 |
代理公司: | 广州华进联合专利商标代理有限公司 44224 | 代理人: | 万志香;胡杰 |
地址: | 510663 广东*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 全程 定量 检测 肌钙蛋白 免疫 层析 试纸 及其 制备 方法 | ||
1.一种全程定量检测肌钙蛋白I的免疫层析试纸条,所述试纸条由样品垫(1)、玻璃纤维膜标记垫(2)、硝酸纤维膜包被膜(3)、吸水纸(4)顺次搭接粘贴在底板(7)上构成,其特征在于,所述玻璃纤维膜标记垫(2)上包被有荧光胶乳微粒标记的肌钙蛋白I单克隆抗体;所述硝酸纤维膜包被膜(3)包括检测区(5)和质控区(6),所述检测区(5)包被有与所述荧光胶乳微粒标记的肌钙蛋白I单克隆抗体处于不同表位的另一种肌钙蛋白I单克隆抗体,所述质控区(6)包被羊抗鼠IgG。
2.根据权利要求1所述的全程定量检测肌钙蛋白I的免疫层析试纸条,其特征在于,所述荧光胶乳微粒标记的肌钙蛋白I单克隆抗体的浓度为0.1-1mg/ml,按1∶20-1∶500的稀释度,100μl/20-30cm的喷膜用量涂覆在玻璃纤维膜标记垫上。
3.根据权利要求1所述的全程定量检测肌钙蛋白I的免疫层析试纸条,其特征在于,所述检测区包被的肌钙蛋白I单克隆抗体的浓度为0.5~2mg/ml,在试纸条上的喷膜用量为100μl/20-30cm。
4.根据权利要求1所述的全程定量检测肌钙蛋白I的免疫层析试纸条,其特征在于,所述羊抗鼠IgG的浓度为1.0~2mg/ml,在试纸条上的喷膜用量为100μl/20-30cm。
5.根据权利要求1所述的全程定量检测肌钙蛋白I的免疫层析试纸条,其特征在于,所述荧光胶乳微粒的直径为100-1000nm。
6.根据权利要求1所述的全程定量检测肌钙蛋白I的免疫层析试纸条,其特征在于,所述荧光胶乳微粒受激发后发射的波长为600nm-700nm。
7.一种权利要求1所述的全程定量检测肌钙蛋白I的免疫层析试纸条的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
A.按常规方法共价活化荧光胶乳;
B.制备玻璃纤维膜标记垫
将活化后的荧光胶乳超声波200W处理30秒后,按照1μg~125μg抗体/100μl荧光胶乳的比例加入肌钙蛋白I单克隆抗体,混匀后室温搅拌反应1.5-3小时,离心洗涤2-4次,每次10000~15000xg、离心5~15分钟,沉淀用PBS-TBN溶解并超声波100W处理30秒,用PBS-TBN恢复离心前体积,按100μl/20-30cm的喷膜用量涂覆到玻璃纤维膜标记垫上;
C.制备硝酸纤维素包被膜
分别将与玻璃纤维膜标记垫上的肌钙蛋白I单克隆抗体位于不同表位另一株肌钙蛋白I单克隆抗体和羊抗鼠IgG用包被缓冲液分别调节至0.5~2mg/ml和1.0~2mg/ml,按膜包被液量为100μl/20-30cm,将肌钙蛋白I单克隆抗体和羊抗鼠IgG喷到硝酸纤维素包被膜上对应的检测区和质控区进行包被,凉干,备用;
D.在底衬上顺次相互搭接地粘贴样品垫、玻璃纤维膜标记垫、硝酸纤维素包被膜和吸水纸,即得。
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