[发明专利]一种全程定量检测肌钙蛋白I的免疫层析试纸条及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于医学检验领域，尤其涉及一种全程定量检测肌钙蛋白I的免疫层析试纸条及其制备方法。

背景技术

心血管疾病发病率高、致残率高、死亡率高、并发症多，对健康危害极为严重。心血管检验是整个心血管领域中的“瓶颈”学科，只有在尽可能段的时间内正确诊断疾病，才有可能及时有效的将先进治疗手段用于临床，使患者受益。随着对心血管诊断标志物研究的日益深入，更加明确了相关标志物对于临床意义，心脏标志物的检测可直接影响心血管疾病患者的临床诊断、危险分层、治疗方案选择和预后判断。因此缩短心脏标志物检测的周转时间(turn-aroundtime，TAT)对于临床早期诊断和早期治疗心血管疾病具有重要的意义，其中心肌肌钙蛋白(cTn)又是目前心血管疾病临床敏感性和特异性最好的心肌损伤标志物，已成为心肌组织损伤(如心肌梗死)最重要的诊断依据。

在心脏疾病的临床诊断与筛查过程中，各种检测技术的应用为及时早发现、诊断和治疗提供了严格的科学依据。目前常用的心脏疾病检测诊断方法，主要包括：非实验室诊断的如家族心脏病史调查、心电图检查、X射线胸透检查、心电图负荷实验、心导管术、心脏超声波检查等和实验室检验的如心脏标志物肌酸激酶(CK)与肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白I(cTnI)或肌钙蛋白T(cTnT)、肌红蛋白(Myoglobin)、BNP或NT-proBNP检测等。

心脏疾病非实验室检测操作需要专业的仪器设备和人员，成本高；实验室方法心脏标志物的检测目前已经广泛应用于心脏疾病的检测诊断，但主要集中在检验科或生化室的如贝克曼、西门子、罗氏、德灵等大型生化检测系统，由于检测成本高、样本检测周转时间较长，通常也很难保证心脏标志物对于时间的要求，血管病发紧急，预后危重，所以心脏标志物的POCT(POINT-OF-CAREtesting)检测是发展最快的一部分。目前市场上主要的检测系统包括：美国Biosite的Biosite Triage检测系统、加拿大的Response的RAMP检测系统，美国Abbott的i-SATA检测系统以及日本Mitsubishi Kagaku Iatron的Pathfast检测系统等。

荧光免疫分析方法(fluoroisnmunoassay，FLA)是近年来发展起来的一种微量分析方法，是目前最灵敏的微量分析技术之一，根据荧光的光谱和荧光强度，对物质进行定性或定量分析，具有高灵敏度、选择性强、需样量少和操作简便等优点。其检测灵敏度较放射免疫分析(RIA)高出多个数量级；其测定灵敏度通常比分光光度法高2-4个数量级，在生化分析中的应用较为广泛。但目前的荧光免疫分析绝大多数为液相的均相体系，试剂受制于保存条件与效期，不利于现场、基层单位的项目开展。而固相荧光免疫分析法则在保持高灵敏度的同时，又很好的解决试剂的保存、现场操作的问题，成为便携式诊断医疗器械的研究热点。该技术尚未在疾病诊断领域获得较广泛的运用，在国际上属于领先技术，在国内处于初级研究阶段。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术中存在的不足，提供一种灵敏度高、稳定性强、测定准确的全程肌钙蛋白I检测试纸条。

为实现上述目的，本发明采取了以下技术方案：

一种全程定量检测肌钙蛋白I的免疫层析试纸条，所述试纸条由样品垫、玻璃纤维膜标记垫、硝酸纤维膜包被膜、吸水纸顺次搭接粘贴在底板上构成，所述玻璃纤维膜标记垫上包被有荧光胶乳微粒标记的肌钙蛋白I单克隆抗体；所述硝酸纤维膜包被膜包括检测区和质控区，所述检测区包被有与所述荧光胶乳微粒标记的肌钙蛋白I单克隆抗体处于不同表位的另一种肌钙蛋白I单克隆抗体，所述质控区包被羊抗鼠IgG。

优选地，所述荧光胶乳微粒标记的肌钙蛋白I单克隆抗体的浓度为0.1-1mg/ml，按1∶20-1∶500的稀释度，100μl/20-30cm的喷膜用量涂覆在玻璃纤维膜标记垫上。所述检测区包被的肌钙蛋白I单克隆抗体的浓度为0.5～2mg/ml，在试纸条上的喷膜用量为100μl/20-30cm。所述羊抗鼠IgG的浓度为1.0～2mg/ml，在试纸条上的喷膜用量为100μl/20-30cm。

优选地，所述荧光胶乳微粒的直径为100-1000nm。所述荧光胶乳微粒受激发后发射的波长为600nm-700nm。

本发明还提供了一种制备全程定量检测肌钙蛋白I的免疫层析试纸条的方法，采取了以下技术方案：

包括以下步骤：

A.按常规方法共价活化荧光胶乳；

B.制备玻璃纤维膜标记垫