[发明专利]一种玻璃海鞘多肽及其制备

权利要求书

1.一种玻璃海鞘多肽，其特征在于：玻璃海鞘多肽N-末端序列为YQPDKFMLRGELRNN，分子量为5931Da，等电点为7.25。

2.按权利要求1所述的玻璃海鞘多肽，其特征在于：所述玻璃海鞘多肽按如下步骤得到：

1)将新鲜的海鞘通过有机溶剂以4-20℃进行沉淀提取1-3次，沉淀物通过滤膜进行超滤截留大于5KDa物质，待用；

2)将上述截留大于5KDa物质，以0.05-0.5M的NaCl缓冲液作为洗脱液进行DEAE阴离子交换柱层析，收集0.15M NaCl缓冲液洗脱组分，待用；

3)将上述收集的洗脱组分经Superdex75分子筛凝胶层析，用超纯水做洗脱液，流速为0.8-1.2ml/min，收集洗脱组分，待用；

4)将上述洗脱组分经HPLC C-18反相柱分离纯化，洗脱液为A液和B液，进行梯度洗脱，起始洗脱液中A液占总洗脱液体积的90％，B液占总洗脱液体积的10％，B液每分钟1％的速率上升，流速为0.5-0.8ml/min，当B液占总洗脱液体积的28.4％时出现活性组分，即得到N-末端序列为YQPDKFMLRGELRNN，分子量为5931Da的单一组分玻璃海鞘多肽；其中A液为A液总体积0.1％的TFA和A液总体积99.9％的超纯水，B液为B液总体积0.1％的TFA和B液总体积99.9％的乙腈。

3.按权利要求2所述的玻璃海鞘多肽，其特征在于：所述步骤1)通过有机溶剂沉淀时采用体积百分含量为10％-90％的丙酮水溶液，并且每次沉淀时间为12小时。

4.按权利要求3所述的玻璃海鞘多肽，其特征在于：所述步骤1)通过有机溶剂沉淀时采用体积百分含量为60％-80％的丙酮水溶液。

5.按权利要求1所述的玻璃海鞘多肽，其特征在于：所述多肽为N-末端序列与其同源性在95％以上的变体或其衍生物。

6.一种权利要求1所述的玻璃海鞘多肽的制备方法，其特征在于：1)将新鲜的海鞘通过有机溶剂以4-20℃进行沉淀提取1-3次，沉淀物通过滤膜进行超滤截留大于5KDa物质，待用；

2)将上述截留大于5KDa物质，以0.05-0.5M的NaCl缓冲液作为洗脱液进行DEAE阴离子交换柱层析，收集0.15M NaCl缓冲液洗脱组分，待用；

3)将上述收集的洗脱组分经Superdex75分子筛凝胶层析，用超纯水做洗脱液，流速为0.8-1.2ml/min，收集洗脱组分，待用；

4)将上述洗脱组分经HPLC C-18反相柱分离纯化，洗脱液为A液和B液，进行梯度洗脱，起始洗脱液中A液占总洗脱液体积的90％，B液占总洗脱液体积的10％，B液每分钟1％的速率上升，流速为0.5-0.8ml/min，当B液占总洗脱液体积的28.4％时出现活性组分，即得到N-末端序列为YQPDKFMLRGELRNN，分子量为5931Da的单一组分玻璃海鞘多肽；其中A液为A液总体积0.1％的TFA和A液总体积99.9％的超纯水，B液为B液总体积0.1％的TFA和B液总体积99.9％的乙腈。

7.按权利要求6所述的玻璃海鞘多肽的制备，其特征在于：所述步骤1)通过有机溶剂沉淀时采用体积百分含量为10％-90％的丙酮水溶液，并且每次沉淀时间为12小时。

8.按权利要求7所述的玻璃海鞘多肽的制备，其特征在于：，其特征在于：所述步骤1)通过有机溶剂沉淀时采用体积百分含量为60％-80％的丙酮水溶液。