[发明专利]一种玻璃海鞘多肽及其制备

说明书

技术领域

本发明涉及药物科学领域，具体的说是一种玻璃海鞘多肽及其制备。

背景技术

海洋药物是目前药物研究中的一大热点领域，其中以抗肿瘤药物的研究成果最为引人注目，各国科学家已经从海洋动植物中分离纯化出多种结构新颖且具有特异活性的抗肿瘤化合物，但是活性物质在海洋动植物中的含量低、分离纯化困难是海洋抗肿瘤活性物质的分离纯化面临的一大难题。要分离得到一个高活性的化合物需要大量的原材料、合理的试验路线和先进的分离纯化设备。在迄今为止并未并未见以玻璃海鞘为原料分离纯化多肽类物质并用于预防和治疗肿瘤疾病的报道。

发明内容

本发明目的在于提供一种玻璃海鞘多肽及其制备。

为实现上述目的，本发明所采用的技术方案为：

一种玻璃海鞘多肽：玻璃海鞘多肽N-末端序列为YQPDKFMLRGELRNN，分子量为5931Da，等电点为7.25。

所述玻璃海鞘多肽按如下步骤得到：

1)将新鲜的海鞘通过有机溶剂以4-20℃进行沉淀提取1-3次，沉淀物通过滤膜进行超滤截留大于5KDa物质，待用；

2)将上述截留大于5KDa物质，以0.05-0.5M的NaCl缓冲液作为洗脱液进行DEAE阴离子交换柱层析，收集0.15M NaCl缓冲液洗脱组分，待用；

3)将上述收集的洗脱组分经Superdex75分子筛凝胶层析，用超纯水做洗脱液，流速为0.8-1.2ml/min，收集洗脱组分，待用；

4)将上述洗脱组分经HPLC C-18反相柱分离纯化，洗脱液为A液和B液，进行梯度洗脱，起始洗脱液中A液占总洗脱液体积的90％，B液占总洗脱液体积的10％，B液每分钟1％的速率上升，流速为0.5-0.8ml/min，当B液占总洗脱液体积的28.4％时出现活性组分，即得到N-末端序列为YQPDKFMLRGELRNN，分子量为5931Da的单一组分玻璃海鞘多肽；其中A液为A液总体积0.1％的TFA和A液总体积99.9％的超纯水，B液为B液总体积0.1％的TFA和B液总体积99.9％的乙腈。

所述步骤1)通过有机溶剂沉淀时采用体积百分含量为10％-90％的丙酮水溶液，并且每次沉淀时间为12小时。

所述步骤1)通过有机溶剂沉淀时采用体积百分含量为60％-80％的丙酮水溶液。所述多肽为N-末端序列与其同源性在95％以上的变体或其衍生物。

玻璃海鞘多肽的制备方法：1)将新鲜的海鞘通过有机溶剂以4-20℃进行沉淀提取1-3次，沉淀物通过滤膜进行超滤截留大于5KDa物质，待用；

2)将上述截留大于5KDa物质，以0.05-0.5M的NaCl缓冲液作为洗脱液进行DEAE阴离子交换柱层析，收集0.15M NaCl缓冲液洗脱组分，待用；

3)将上述收集的洗脱组分经Superdex75分子筛凝胶层析，用超纯水做洗脱液，流速为0.8-1.2ml/min，收集洗脱组分，待用；

4)将上述洗脱组分经HPLC C-18反相柱分离纯化，洗脱液为A液和B液，进行梯度洗脱，起始洗脱液中A液占总洗脱液体积的90％，B液占总洗脱液体积的10％，B液每分钟1％的速率上升，流速为0.5-0.8ml/min，当B液占总洗脱液体积的28.4％时出现活性组分，即得到N-末端序列为YQPDKFMLRGELRNN，分子量为5931Da的单一组分玻璃海鞘多肽；其中A液为A液总体积0.1％的TFA和A液总体积99.9％的超纯水，B液为B液总体积0.1％的TFA和B液总体积99.9％的乙腈。

所述步骤1)通过有机溶剂沉淀时采用体积百分含量为10％-90％的丙酮水溶液，并且每次沉淀时间为12小时。所述步骤1)通过有机溶剂沉淀时采用体积百分含量为60％-80％的丙酮水溶液。

本发明所具有的优点：

1.本发明中涉及的多肽是一种海洋来源的物质，由于海洋生态环境的特殊性，使得海洋生物具有某些陆上生物所没有的活性物质，这些活性物质往往具有结构新颖、高活性、耐药性低等特点，可以为新药研究和开发提供模式结构和医药前体。

2.该多肽在提取过程中经过了70℃高温加热，加热后仍保持活性不变说明该多肽具有热稳定性，将来制成药后能延长药品的货架寿命。

附图说明：

图1为本发明实施例2提取的多肽PI5931。用ABI公司的Q Trap离子喷雾质谱仪(Applied Biosystems，Foster City，CA，USA)以增强的方式测定其分子量。质谱仪配以TurbolonSpray source并以阳离子模式操作