[发明专利]一种流感病毒裂解疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种流感病毒裂解疫苗，其特征在于，该流感病毒裂解疫苗含有H₁N₁、H₃N₂和B型三种流感血凝素、CpG ODN佐剂和铝佐剂。

2.根据权利要求1所述的流感病毒裂解疫苗，其特征在于，所述流感病毒裂解疫苗每剂含有H₁N₁、H₃N₂和B型流感血凝素各2-10μg、CpG ODN佐剂10-100μg、铝佐剂100-1000μg。

3.根据权利要求1或2所述的流感病毒裂解疫苗，其特征在于，所述CpG ODN佐剂含有5’-GACGTT-3’和/或5’-GTCGTT-3’特征序列，其中特征序列5’-GACGTT-3’和5’-GTCGTT-3’为非甲基化，并且全硫代修饰。

4.根据权利要求3所述的流感病毒裂解疫苗，其特征在于，所述非甲基化是指脱氧胞苷的第5位碳原子未被甲基化。

5.一种制备权利要求1-4任一项所述的流感病毒裂解疫苗的方法，包括以下步骤：鸡胚增值流感疫苗，超滤浓缩，离心纯化，裂解，二次纯化，灭活，稀配分装。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)鸡胚增值流感疫苗：将H₁N₁、H₃N₂、B型流感病毒工作种子分别接种于10日龄健康鸡胚尿囊腔中，增值流感病毒；

2)超滤浓缩：分别收集H₁N₁、H₃N₂、B型流感病毒尿囊液，用截留分子量100-300kD的超滤膜进行超滤浓缩；

3)离心纯化：将超滤浓缩后的流感病毒液样品经蔗糖密度梯度离心纯化，通过280nm紫外监测，收集有病毒峰的病毒液为纯化的H₁N₁、H₃N₂、B型流感病毒液；

4)裂解：收集纯化的病毒液，经Triton X-100裂解纯化，得到H₁N₁、H₃N₂、B型流感病毒裂解液；

5)二次纯化：流感病毒裂解液再经蔗糖密度梯度离心纯化，通过280nm紫外监测，收集有病毒峰的病毒液为二次纯化液；

6)灭活：流感病毒二次纯化液经甲醛灭活，得到H₁N₁、H₃N₂、B型病毒原液；

7)稀释分配：根据H₁N₁和H₃N₂和B型流感病毒单价病毒液的血凝素浓度测定值，按照每剂含H₁N₁和H₃N₂和B型流感血凝素各2-10μg、CpGODN佐剂10-100μg、铝佐剂100-1000μg的配比，分装到预填充注射器即获得含CpG ODN和铝佐剂的流感裂解疫苗。