[发明专利]一种流感病毒裂解疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种含CpG ODN和铝佐剂的流感病毒裂解疫苗及其制备方法。

背景技术

流感是由流感病毒引起的全球流行的呼吸道传播疾病，接种流感疫苗是预防流感的有效手段。

传统的流感病毒疫苗包括流感全病毒灭活疫苗、流感病毒裂解疫苗和流感亚单位疫苗，这些疫苗均采用肌肉注射方法，不含佐剂。

CpG ODN(oligodeoxynucleotides，ODN)是一种含有非甲基化CpG二核苷酸序列的单链寡核苷酸，CpG ODN可以被免疫细胞上Toll样受体9(Toll-like receptor 9，TLR-9)所识别，并增强免疫反应。美国Dynavax公司以CpG ODN为佐剂的重组乙肝疫苗在三期临床研究中显示了优于普通乙肝疫苗的免疫效果，接种两针后抗体阳转率达到95％，而普通乙肝疫苗接种三针后阳转率为81％。

铝佐剂于1926年研制成功并普遍应用至今。由于铝佐剂可以吸附抗原，对抗原起到缓释作用，被普遍应用于蛋白类疫苗的生产。其作用主要是刺激Th2有关抗体产生，增强体液免疫应答，但近年研究结果表明铝佐剂对于增强细胞免疫应答的作用不是很明显。

传统的流感病毒疫苗为流感病毒灭活全病毒疫苗或流感病毒裂解疫苗，成人剂量是含每型血凝素15微克，儿童剂量是含每型血凝素7.5微克，由于传统疫苗不含佐剂，而利用本专利制备的含CpG ODN和铝佐剂的注射型流感病毒裂解疫苗，可以降低抗原用量，增加疫苗供应能力。

以CpG ODN佐剂和铝佐剂制备的流感病毒裂解疫苗目前国内外未见文献报道。

发明内容

本发明克服了传统流感疫苗的缺陷，提供了一种免疫效果好、可以降低流感病毒抗原用量的注射型流感病毒裂解疫苗，且可以应付流感大流行。

本发明的一种流感病毒裂解疫苗，含有H₁N₁、H₃N₂和B型流感血凝素、CpG ODN佐剂和铝佐剂。

优选地，所述流感病毒裂解疫苗，每剂含H₁N₁、H₃N₂和B型流感血凝素各2-10μg、CpG ODN佐剂10-100μg、铝佐剂100-1000μg。

本发明还提供了一种制备上述流感病毒裂解疫苗的方法，包括：鸡胚增值流感疫苗，超滤浓缩，离心纯化，裂解，二次纯化，灭活，稀配分装。

更具体地，该制备方法包括下述步骤：

1)鸡胚增值流感疫苗：将H₁N₁、H₃N₂、B型流感病毒工作种子分别接种于10日龄健康鸡胚尿囊腔中，增值流感病毒；

2)超滤浓缩：分别收集H₁N₁、H₃N₂、B型流感病毒尿囊液，用截留分子量为100-300kD的超滤膜进行超滤浓缩；

3)离心纯化：将超滤浓缩后的流感病毒液样品经蔗糖密度梯度离心纯化，通过280nm紫外监测，收集有病毒峰的病毒液为纯化的H₁N₁、H₃N₂、B型流感病毒液；

4)裂解：收集纯化的病毒液，经Triton X-100裂解纯化，得到H₁N₁、H₃N₂、B型流感病毒裂解液；

5)二次纯化：

流感病毒裂解液再经蔗糖密度梯度离心纯化，通过280nm紫外监测，收集有病毒峰的病毒液为二次纯化液；

6)灭活：

流感病毒二次纯化液经甲醛灭活，得到H₁N₁、H₃N₂、B型流感病毒原液；

7)稀配分装：

根据H₁N₁和H₃N₂和B型流感病毒单价病毒液的血凝素浓度测定值，按每剂含H₁N₁和H₃N₂和B型流感血凝素各2-10μg、CpG单链脱氧核苷酸佐剂10-100μg、铝佐剂100-1000μg的配比，分装到预填充注射器，即获得含CpG ODN佐剂的流感裂解疫苗。