[发明专利]脑膜炎球菌荚膜多糖多价结合疫苗，其制备方法和应用

权利要求书

1.一种脑膜炎球菌荚膜多糖多价结合疫苗，包含至少两种A群、C群、Y群或W135群脑膜炎球菌荚膜多糖与霍乱毒素B亚单位的偶联物。

2.根据权利要求1所述的多价结合疫苗，其特征在于，所述的至少两种A群、C群、Y群或W135群脑膜炎球菌多糖与霍乱毒素B亚单位的偶联物含量按多糖含量计算为4～8±4～8×30％μg/ml。

3.根据权利要求2所述的多价结合疫苗，还包含药学上可接受的赋形剂。

4.根据权利要求3所述的多价结合疫苗，还包含佐剂，所述佐剂为铝盐佐剂，优选为氢氧化铝、磷酸铝或硫酸铝。

5.制备权利要求1或2所述的多价结合疫苗的方法，包括如下步骤：

1)往A群、C群、Y群或W135群脑膜炎球菌的培养液中加入甲醛溶液杀菌，离心去除菌体，收集上清液；

2)将步骤1)制备的上清液在8～32℃，10～2000rpm下，加入絮凝剂，pH调至5.0-7.0，在电场强度为5～30v/cm的电场中进行絮凝10～120min，固液分离获得粗制荚膜多糖；

3)将步骤2)制备的粗制荚膜多糖溶解于1/10饱和中性醋酸钠溶液中；用2倍体积的冷酚至少提取一次，离心收集上清液，再将上清液透析或者超滤去除酚；超速离心去除内毒素后加入乙醇至终浓度为75％-80％，充分搅拌后，离心收集沉淀；沉淀物用无水乙醇和丙酮至少各洗一次并干燥，获得精制荚膜多糖；

4)以步骤3)制备的精制荚膜多糖为半抗原，以霍乱毒素B亚单位为载体蛋白，利用溴化氰活化多糖，以己二酰肼为间隔剂，以碳二亚胺为连接剂偶联获得A群、C群、Y群或W135群脑膜炎球菌多糖与霍乱毒素B亚单位的偶联物；

5)将至少两种步骤4)制备的偶联物进行混合，即得脑膜炎球菌荚膜多糖多价结合疫苗。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的絮凝剂为具有活性氨基和羟基的阳离子型絮凝剂。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的阳离子型絮凝剂为苯乙烯磺酸钠、十二烷基苯磺酸钠、磺甲基化聚丙烯酰胺、壳聚糖和改性淀粉中的一种或几种。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的絮凝剂的加入量为10～1000ppm。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述的絮凝剂的加入量为100～450ppm。

10.权利要求1～4任一项所述的脑膜炎球菌荚膜多糖多价结合疫苗在治疗或预防脑膜炎球菌引起的疾病的药物中的应用。