[发明专利]大肠肿瘤的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及大肠肿瘤有无的判定方法，更详细地说，涉及大肠癌或大肠腺瘤的判定方法，其特征在于，测定被检细胞中的基因组序列上的人类twist同源物1(Homo sapiens twist homolog 1)(果蝇属(Drosophila))基因(以下记为TWIST1)的-477～-747中的CpG序列的甲基化程度，还涉及大肠肿瘤判定用试剂盒。

背景技术

在盲肠、结肠、直肠发生的大肠肿瘤的概念包括作为良性肿瘤的大肠腺瘤以及有时恶性度高、具有转移性的大肠癌，其中，大肠癌是日本目前患病者数第二多的癌症，已知大多数大肠癌是由于消化道内面的粘膜上皮细胞的突变而产生的。认为粘膜上皮细胞癌变的主要原因是控制细胞增殖的基因组DNA上的变异，并且其它环境因子(风险因子)、遗传、病毒感染等作为影响癌变的因子是已知的。

与多数癌同样，大肠癌也是早期发现对其治疗最为重要，到目前为止已经开发了多种检查方法。主要的检查方法有便潜血检查、血液检查、直肠指诊、使用大肠内窥镜的诊断等，但是，便潜血检查在早期癌的检测灵敏度方面存在问题，血液检查(检查血中所含的肿瘤标记)也存在只有对晚期癌才显示阳性这样的问题，直肠指诊存在只能在手指能够到达的范围内诊断这样的问题，利用大肠内窥镜的诊断也存在对于难以视觉辨认的早期癌的检测灵敏度差这样的问题，等等，各种检查方法特别是在对早期癌的灵敏度方面都存在问题。

在癌的初期阶段，将要癌变的细胞的基因组DNA中发生突变，着眼于此，已经开发出了以DNA和/或作为其表达产物的RNA的变异、尤其是DNA甲基化为癌变指标的癌检测方法。专利文献1中公开了与癌变有关的人DNA序列，另外还公开了以波形蛋白基因序列上的甲基化为指标的大肠癌的检测方法(专利文献2)、以SPARC基因的甲基化为指标的癌检测方法(专利文献3)、利用神经酰胺羟化酶的mRNA表达信息的癌检测方法(专利文献4)、以APC、K-ras和p53基因的变异为指标的大肠癌检测方法(专利文献5)、以APC和/或DCC基因的甲基化为指标的消化器官癌检测方法(专利文献6)等，但现状是任一方法均在检测灵敏度和/或特异性、成本等方面存在问题，不能在临床上实用化。

根据这些现状，希望开发出通过以较少的基因信息为指标，更具体来说是以1个基因序列上的甲基化为指标，对早期的灵敏度好、与发展的程度相适应、并且以高特异性检测消化器官肿瘤、特别是大肠肿瘤、具体地是大肠癌或大腺腺瘤的方法。

另一方面，TWIST1基因是作为与果蝇属的黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)的形态形成相关的转录调节因子TWIST的人类同源物而分离出的基因，也称为H-TWIST或果蝇属的TWIST同源物(TWIST homolog of Drosophila)。其本质是碱性螺旋-环-螺旋(Basic helix-loop-helix，bHLH)型转录调节因子，一般认为与发生时细胞的系谱、分化相关。已知在TWIST1基因本体(编码区)发生的变异会引起尖头并指畸形综合征(Seathre-Chotzen syndrome)，近年的研究暗示其与鼻咽癌细胞获得紫杉醇耐性相关。然而，TWIST1基因的甲基化、特别是存在于调节区域和/或其附近序列的甲基化与大肠细胞的癌变密切相关的事实以前并不为人们所知。