[发明专利]抗人EPO受体的抗体

说明书

发明背景

人红细胞生成素(EPO)是涉及祖红细胞的增殖和分化的166-aa糖蛋白。这些细胞反应由人EPO受体(EPO-R)——508-aa糖蛋白——介导。人EPO受体(EPO-R)是508个氨基酸长度的蛋白质(Swiss Prot P19235)，其含有单个跨膜结构域且已被分类为I型细胞因子受体的生长激素亚家族成员。EPO-R在例如Winkelmann，J.C.等人，Blood 76(1990)24-30和Jones，S.S.等人，Blood 76(1990)31-35)中有描述。EPO-R的活化通过二聚化发生(Matthews，D.J.，PNAS 93(1996)9471-9476)。EPO-R包含8个细胞质酪氨酸位点，其在用EPO刺激后被磷酸化(Li，K.等人，J.Biol.Chem.278(2003)40702-40709；Wu，H.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94(1997)1806-1810)，导致“活化的EPO-R”。

抗EPO-R抗体记载于例如Andrea，A.D.，Blood 82(1993)46-52；Elliott，S.，Blood 107(2006)1892-1895；Kirkeby，A.，J.Nerosci.164(2007)50-58；Miura，O.，Arch.Biochem.306(1993)200-208；和EP 1 146 056，EP 1 327 681，EP 0 773 962，EP 0 776 370，US 2002/0031806，US 2003/0215444，US 2004/0058393，US 2004/0071694，US 2004/0175379，US 2005/0227289，US 2005/0244409，US 2006/0018902，US 6,998,124，US 7,053,184，US 7,081,523，WO 1995/005469，WO 1996/003438，WO 2000/061637，WO 2004/035603A2，WO 2005/100403A2。然而在目前已知的技术水平中，针对EPO-R的已知抗体不能够区分非活化的和活化的EPO-R(见Jelkmann，W.等人，Crit.Rev.Onc/Hematol.67(2008)39-61；Li，K.等人，J.Biol.Chem.278(2003)40702-40709，和Wu，H.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94(1997)1806-1810)。

发明概述

本发明包含特异性结合活化的人EPO受体和区分非活化的和活化的EPO-R的抗体，其允许对EPO-R活化的特定分析，尤其是在来自人组织的细胞和活组织(biopsy)中。

本发明包含抗体，其特征在于特异性结合在第430位(下划线)包含磷酸酪氨酰残基的TPPHLKYLYLVVSD(SEQ ID NO：25)，在第461位(下划线)包含磷酸酪氨酰残基的GLSDGPYSNPYENSLIP(SEQ ID NO：26)，或在第465位(下划线)包含磷酸酪氨酰残基的GLSDGPYSNPYENSLIP(SEQ ID NO：26)人EPO受体片段。

编号涉及不含信号肽的UniProtKB/Swiss-Prot P19235的EPO受体氨基酸序列。

根据本发明的抗体不结合在第430位没有磷酸酪氨酰残基的TPPHLKYLYLVVSD(SEQ ID NO：25)，在第461位没有磷酸酪氨酰残基的GLSDGPYSNPYENSLIP(SEQ ID NO：26)，或在第465位没有磷酸酪氨酰残基的GLSDGPYSNPYENSLIP(SEQ ID NO：26)EPO受体片段。

根据本发明的抗体在UT7细胞裂解物中特异性结合磷酸化的(活化的)EPO受体，所述细胞以100.000至500.000受体/细胞(EPO-R表达细胞)的量表达EPO-R并用500pM EPO处理以活化。根据本发明的抗体在表达EPO受体但不用EPO处理的UT7细胞裂解物中不结合EPO受体。可通过蛋白质印迹测量这些结合。

优选地本发明包含与人EPO-R结合的抗体，其特征在于包含SEQ ID NO：1，9或17的CDR3区作为重链可变结构域CDR3区。