[发明专利]改良的等温链置换扩增

权利要求书

1.一种DNA等温扩增方法，其包括：

向待扩增的DNA提供扩增混合物，所述扩增混合物包含：

与DNA区至少部分互补且包含黄嘌呤核苷的第一引物，

与DNA区至少部分互补且包含黄嘌呤核苷的第二引物，

DNA聚合酶，

能够进行链置换的酶，

识别双链DNA中的黄嘌呤核苷并在一条DNA链中的黄嘌呤核苷位点或在黄嘌呤核苷附近引起切口或碱基切除的酶；和

在基本没有热循环下扩增DNA。

2.如权利要求1所述的方法，其中，所述DNA在添加所述扩增混合物之前、期间或之后变性。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中，所述第一引物与所述DNA的第一链区至少部分互补，并且第二引物与DNA的第二链的DNA区至少部分互补。

4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中，所述第一引物和第二引物是寡核苷酸、寡核苷酸类似物或嵌合性寡核苷酸。

5.如权利要求4所述的方法，其中，所述引物是脱氧寡核苷酸。

6.如权利要求4所述的方法，其中所述引物是选自以下组成的组中的寡核苷酸类似物：插入核酸(INA)、肽核酸(PNA)、己糖醇核酸(HNA)、MNA、阿卓糖醇核酸(ANA)、锁核酸(LNA)、环己基核酸(CAN)、CeNA、TNA、(2’-NH)-TNA、基于核酸的结合物、(3’-NH)-TNA、α-L-核糖-LNA、α-L-木糖-LNA、β-D-木糖-LNA、α-D-核糖-LNA、[3.2.1]-LNA、双环-DNA、6-氨基-双环-DNA、5-表-双环-DNA、α-双环-DNA、三环-DNA、双环[4.3.0]-DNA、双环[3.2.1]-DNA、双环[4.3.0]酰胺-DNA、β-D-吡喃核糖基-NA、α-L-吡喃来苏糖-NA、2’-R-RNA、2’-OR-RNA、α-L-RNA、β-D-RNA及其混合物和杂交物，以及其磷原子修饰物。

7.如权利要求6所述的方法，其中，所述引物包含一个或多个插入性假核苷酸。

8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中，所述引物可以具有两个或更多个黄嘌呤核苷，它们彼此相邻或之间间隔至少几个常规碱基。

9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中，所述DNA聚合酶选自以下组成的组：Taq聚合酶Stoffel片段、Taq聚合酶、高级DNA聚合酶、AmpliTaq、Amplitaq Gold、Titanium Taq聚合酶、KlenTaq DNA聚合酶、Platinum Taq聚合酶、Accuprime Taq聚合酶、Pfu聚合酶、Pfu turbo聚合酶、Vent聚合酶、Vent exo-聚合酶、Pwo聚合酶、9°N_m DNA聚合酶、Therminator、Pfx DNA聚合酶、Expand DNA聚合酶、rTth DNA聚合酶、DyNAzyme^TM EXT聚合酶、Klenow片段、DNA聚合酶1、DNA聚合酶、T7聚合酶、Sequenase^TM、T4DNA聚合酶、Bst聚合酶、Bca聚合酶、Tfi聚合酶、phi-29DNA聚合酶、DNA聚合酶Beta及其修饰形式。

10.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中，所述链置换酶选自以下组成的组：解旋酶、AP核酸内切酶和能够进行链置换的错配修复酶或能够进行链置换的修饰酶。

11.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中，所述DNA聚合酶还具有链置换能力，并且选自以下组成的组：Klenow exo-、Bst DNA聚合酶大片段、Bca聚合酶、Vent exo-、Deep Vent exo-、M-MuLV逆转录酶、9°N_mDNA聚合酶和Phi29DNA聚合酶。

12.如权利要求11所述的方法，其中，所述DNA聚合酶是Klenow Exo-或Bst聚合酶。

13.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中，所述DNA聚合酶是核酸外切酶缺陷型。

14.如权利要求1-13中任一项所述的方法，其中，所述能够识别双链DNA中黄嘌呤核苷的酶是核酸内切酶V、hOGG1或Fpg。