[发明专利]细胞、人工细胞构建体或三维复合组织装配体的冷冻保存方法

权利要求书

1.用于对一种或多种类型的细胞、细胞构建体或三维复合组织装配体进行冷冻保存和长期存储的方法，其包括：

a)将一种或多种类型的细胞或者构成所述细胞构建体或三维组织装配体的不同类型细胞接种至稳定的胶原细胞载体上，所述胶原细胞载体的厚度小于150μm，单位面积质量为10至170g/m²，并具有以下组成：

i)胶原[重量％]：30至80，

ii)酰胺态氮[重量％]：0.06至0.7，

iii)多元醇[重量％]：0至50，

iv)脂质[重量％]：0至20，

v)水[重量％]：5至40，

b)培养所述细胞直到其粘附在所述胶原细胞载体上；

c)洗去未粘附的细胞；

d)在冷冻介质中冷冻带有粘附细胞的所述胶原细胞载体。

2.根据权利要求1的方法，其中形成期望的细胞构建体或三维组织装配体的一种或多种类型细胞被接种在所述胶原细胞载体的两侧。

3.根据权利要求1或2的方法，其中所述胶原细胞载体中的胶原是交联的。

4.根据权利要求1或2的方法，其中所述胶原细胞载体的厚度小于80μm或小于40μm。

5.根据权利要求1或2的方法，其中所述胶原为I型胶原或者I型胶原与III型胶原的混合物或者I型和/或III型胶原与弹性蛋白的混合物。

6.根据权利要求1或2的方法，其中所述多元醇选自甘油、乙二醇、丁烯二醇类、丙二醇类、山梨醇或其他己糖醇、木糖醇或其他戊糖醇及其混合物。

7.根据权利要求1或2的方法，其中所述脂质为植物油。

8.根据权利要求1或2的方法，其中所述胶原细胞载体可包被有细胞外基质的结构蛋白，优选层粘连蛋白、纤连蛋白、弹性蛋白或透明质酸，或者包被有磷灰石或者选自生长因子、细胞因子、导向分子或抗体的功能性分子。

9.根据权利要求1或2的方法，其中所述冷冻介质包含二甲亚砜(DMSO)、海藻糖、甘油或羟乙基淀粉(HES)。

10.根据权利要求1或2的方法，其中所述粘附细胞为真核或原核细胞，或经基因改造的真核或原核细胞。

11.根据权利要求10的方法，其中所述真核细胞为植物细胞、动物细胞或真菌细胞。

12.根据权利要求11的方法，其中所述动物细胞为哺乳动物细胞，原代细胞或永生化细胞均可，优选地为人细胞。