[发明专利]用于生产高纯度神经毒素的手段和方法有效
| 申请号： | 201080008525.X | 申请日： | 2010-02-17 |
| 公开（公告）号： | CN102325792B | 公开（公告）日： | 2018-01-09 |
| 发明（设计）人： | M·普法伊尔;J·弗里德里希;H·V·泰勒;K-H·艾泽勒;C·布林 | 申请（专利权）人： | 莫茨制药有限及两合公司 |
| 主分类号： | C07K16/12 | 分类号： | C07K16/12;C07K14/33;C07K16/06;C07K1/22;A61K38/00 |
| 代理公司： | 北京市中咨律师事务所11247 | 代理人： | 黄革生,林柏楠 |
| 地址： | 德国法*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 生产 纯度 神经 毒素 手段 方法 | ||
1.抗体，其结合由SEQ ID NO:1所示氨基酸序列组成的表位并且不与活性的、完全加工的肉毒杆菌A型神经毒素(BoNT/A)多肽交叉反应。
2.权利要求1的抗体，其是单克隆或多克隆抗体。
3.权利要求1的抗体，其中所述表位包含在蛋白水解未加工的或部分加工的BoNT/A神经毒素多肽中。
4.权利要求3的抗体，其中所述BoNT/A神经毒素多肽来自梭菌属。
5.生产特异性结合未加工的和/或部分加工的神经毒素多肽的抗体的方法，包括步骤：
a)将来自用包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列的肽免疫原免疫过的非人动物的多克隆抗血清与如SEQ ID NO:25所示的肽在允许形成包含前述肽和特异性结合未加工的或部分加工的神经毒素多肽的抗体的复合物的条件下接触；
b)从抗血清中去除步骤a)中形成的复合物；和
c)从所述复合物中释放与未加工的或部分加工的神经毒素多肽特异性结合的抗体，
其中所述方法在步骤a)之前进一步包括步骤：
i)将所述来自用包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列的肽免疫原免疫过的非人动物的多克隆抗血清与下列捕获肽：SLD、LDK和YNK在如下条件下接触，所述条件允许形成包含多克隆抗血清中包含的非特异性抗体和捕获肽的捕获复合物；和
ii)从多克隆抗血清中去除捕获复合物。
6.权利要求5的方法，其中所述免疫原还包含KLH。
7.权利要求6的方法，其中所述KLH通过接头N-[γ-马来酰亚胺基丁酰氧基]琥珀酰亚胺酯(GMBS)与如SEQ ID NO:25所示的肽连接。
8.权利要求5-7任一项的方法，其中步骤a)至c)是通过亲和层析进行的。
9.权利要求5-7任一项的方法，其中步骤i)至ii)是通过亲和层析进行的。
10.通过权利要求5-9任一项的方法获得的抗体。
11.权利要求10的抗体，其是多克隆抗体。
12.权利要求1-4、10或11任一项的抗体，其中所述抗体与固相支持体偶联。
13.权利要求1-4或10-12任一项的抗体的用途，用于从加工的神经毒素多肽中去除部分加工的和/或未加工的神经毒素多肽。
14.权利要求1-4或10-12任一项的抗体的用途，用于检测样品中部分加工的和/或未加工的肉毒杆菌A型神经毒素(BoNT/A)。
15.用于生产加工的神经毒素多肽的方法，包括步骤：
a)将含有加工的和部分加工的和/或未加工的神经毒素多肽的混合物的溶液与权利要求1-4或10-12的抗体在允许所述抗体与未加工的和/或部分加工的神经毒素多肽结合的条件下接触，从而形成包含所述抗体和部分加工的或未加工的神经毒素多肽的复合物，和
b)去除步骤a)中形成的所述复合物，从而获得含有加工的神经毒素多肽且不含未加工的和/或部分加工的神经毒素多肽的溶液。
16.权利要求15的方法，其中步骤a)和b)是通过亲和层析进行的。
17.权利要求15或16的方法，其中所述方法还包括离子交换层析。
18.用于生产药物的方法，包括权利要求15-17任一项方法的步骤以及将所述溶液配制成药物的另一步骤，所述溶液含有加工的神经毒素多肽且不含未加工的和/或部分加工的神经毒素多肽。
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