[发明专利]核酸复合体及核酸转运用组合物

说明书

技术领域

本发明涉及一种核酸复合体，所述核酸复合体的向细胞内转运能够进行RNA干扰或者翻译抑制的核酸分子的转运能力优异，低毒性且安全性高，并涉及一种能够有效地将该核酸复合体转运至细胞内的核酸转运用组合物。

背景技术

近年来，随着生物技术的发展，已经发现了多种在细胞内发挥RNA干扰功能的核酸分子。例如，已知siRNA(small interfering RNA：小干涉RNA)引起细胞中存在的靶基因的mRNA分解，阻碍靶基因表达(RNA interference：RNA干扰)。由该RNA干扰产生的阻碍靶基因表达的功能在减轻或治疗由特定基因或基因组的异常表达而引起的疾病症状方面是有用的，故人们期待开发siRNA用作治疗药物。但是，在包括siRNA的基因治疗中，由于核酸分子是具有负电荷的水溶性高分子，所以其向细胞内的基因转运效率非常低，导致无法得到有效的治疗效果的问题。

一直以来，为了将基因有效地转运到细胞内，已知有利用载体(运载体)。运载体分为病毒性运载体和非病毒性运载体。病毒性运载体显示出高核酸导入效率，但在病原性、免疫原性、细胞毒性等安全性方面存在很多不清楚的地方，因此临床应用中期望使用非病毒性运载体。

作为非病毒性运载体，已经市售有Lipofectamine^TM2000，进而，报道了一种含有特定结构的阳离子性脂质(参见专利文献1)；一种含有两亲性化合物及聚阳离子的组合物(参见专利文献2)等。使用非病毒性运载体将核酸分子转运至细胞内时如下进行：通过将应转运的核酸分子和非病毒性运载体混合进行复合化，然后将其与靶细胞接触。非病毒性运载体可以形成脂质体时，在将核酸分子封入脂质体内的状态下，导入细胞内，由此将核酸分子转运至细胞内。

但是，siRNA等能够进行RNA干扰的核酸分子由于具有稳定性低、显示强负电性这些特有性质，所以与作为非病毒性运载体的阳离子性运载体混合时，因电荷中和导致稳定性降低，存在无法持续地将核酸分子导入细胞内的问题。至此，虽然已知通过将siRNA和阳离子性聚合物制成复合体而将核酸封入脂质体的例子(参见非专利文献1)，但是从阳离子性聚合物的细胞毒性的观点考虑，还未确认到实用性上有效。进而，即使现有的非病毒性运载体能够与核酸分子形成稳定的复合体，也存在向细胞内的转运能力低、或者即使转运至细胞内复合体的滞留时间也短的问题。因此，现有的非病毒性运载体存在下述缺陷：无法在细胞内持续地保持核酸分子，也无法持续发挥基于核酸分子的期望的有用效果。

鉴于上述现有技术，迫切期望开发出下述技术，所述技术低毒性且安全性高，并且用于有效地将以siRNA为代表的能够进行RNA干扰或者翻译抑制的核酸分子转运至细胞内，且持续地保持核酸分子。

专利文献1：日本特表2002-529439号公报

专利文献2：日本特表2005-508394号公报

非专利文献1：Kintaro Kogure et al.，Development of a non-viral multifunctional envelope-type nano device by a novel lipid film hydration method，J，Control，Release，98(2004)317-323

发明内容

本发明的目的在于解决上述现有技术中的问题。具体而言，本发明的目的在于提供一种低毒性且高安全性的、可以将siRNA等能够进行RNA干扰或者翻译抑制的核酸分子转运至细胞内的核酸复合体，并提供一种能够有效地将该核酸复合体转运至细胞内的核酸转运用组合物。另外，本发明的目的在于提供一种含有核酸转运用组合物的药物组合物、及通过使核酸转运用组合物与细胞接触将能够进行RNA干扰或者翻译抑制的核酸分子转运至细胞内的方法。

本发明人等为了解决上述课题进行了深入研究，结果发现通过使用作为向细胞内导入的对象的核酸分子(能够进行RNA干扰或者翻译抑制的核酸分子)和大环糊精(cycloamylose)化合物形成复合体，能够得到低毒性且高安全性的、并且可以将该核酸分子转运至细胞内的核酸复合体。进而，发现作为用于将该核酸复合体导入细胞内的核酸转运用载体，使用含有(A)二酰基磷脂酰胆碱、(B)胆固醇及/或其衍生物、以及(C)脂肪族伯胺的载体，由此能够更进一步提高安全性、及细胞内转运的有效性。本发明是基于上述发现并且进行了反复研究而完成的。

即，本发明提供下述列举的方案的发明：