[发明专利]识别基因型的方法

权利要求书

1.一种识别基因型的方法，是识别基因突变中的基因型的方法，其特征在于，包括：

核酸扩增工序，通过核酸扩增反应对具有试样中所含基因中的突变位点的区域进行扩增，获得含有试样双链核酸的扩增反应液；以及

识别工序，通过将上述核酸扩增工序中所获得的扩增反应液与上述突变位点为特定基因型并且由标记物质所标记的标准双链核酸加以混合而进行竞争性链置换反应，并测定标准双链核酸与试样双链核酸之间发生链置换的程度，由此识别上述标准双链核酸与上述试样双链核酸的同一性，

并且，上述竞争性链置换反应是在抑制了由聚合酶引起的延伸反应的条件下进行。

2.如权利要求1所述的识别基因型的方法，其特征在于，

上述竞争性链置换反应是在延伸反应抑制剂的存在下进行。

3.如权利要求2所述的识别基因型的方法，其特征在于，上述延伸反应抑制剂是螯合剂。

4.如权利要求3所述的识别基因型的方法，其特征在于，上述延伸反应抑制剂是EDTA，上述竞争性链置换反应的反应液中的EDTA浓度为15mM以上。

5.如权利要求2所述的识别基因型的方法，其特征在于，上述延伸反应抑制剂是DNA合成抑制剂。

6.如权利要求1所述的识别基因型的方法，其特征在于，在竞争性链置换反应之前，对上述核酸扩增工序中所获得的扩增反应液进行热处理。

7.如权利要求1所述的识别基因型的方法，其特征在于，在竞争性链置换反应之前，对上述核酸扩增工序中所获得的扩增反应液，进行单链核酸分解处理或者核苷三磷酸分解处理。

8.如权利要求1～7中任一项所述的识别基因型的方法，其特征在于，

在构成上述标准双链核酸的两条核酸链中，分别地，通过第一标记物质标记一条链的3′端部，通过第二标记物质标记另一条链的5′端部，

上述第一标记物质和上述第二标记物质是能够互相进行能量转移的物质，

通过测定由上述第一标记物质和上述第二标记物质之间的能量转移引起的能量变化的程度，测定上述识别工序中的标准双链核酸与试样双链核酸之间链置换的发生程度。

9.如权利要求8所述的识别基因型的方法，其特征在于，

上述第一标记物质和上述第二标记物质中的至少一者是荧光物质，

上述识别工序中的竞争性链置换反应是通过将含有上述标准双链核酸和上述试样双链核酸的反应液的温度从高温慢慢降低而进行，

并且，基于由上述反应液的温度降低引起的荧光强度的变化量与由不含上述试样双链核酸而含上述标准双链核酸的对照反应液的温度降低引起的荧光强度的变化量的比值，测定标准双链核酸与试样双链核酸之间链置换的发生程度。

10.一种基因型识别用试剂盒，是通过权利要求1所述的识别基因型的方法识别基因型所用的试剂盒，其特征在于，具有：

选自于由延伸反应抑制剂、单链核酸分解酶和核苷三磷酸分解酶所组成的组中的一种以上；

用于制备试样双链核酸的核酸扩增试剂；以及

在标准核酸的一条链的5′端部导入了一种标记物质而在标准核酸的另一条链的3′端部导入了另一种标记物质的标准双链核酸。