[发明专利]用于干细胞培养的方法和组合物

权利要求书

1.组合物，包含基础培养基和肌球蛋白II抑制剂。

2.权利要求1的组合物，还包含结合并抑制RHO的激酶结构域的ROCK抑制剂。

3.权利要求1的组合物，其中肌球蛋白II抑制剂是肌球蛋白II马达活性抑制剂或其类似物。

4.权利要求1的组合物，还包含血清。

5.权利要求4的组合物，其中血清与待培养的细胞是异体的。

6.权利要求4的组合物，其中血清与待培养的细胞是自体的。

7.权利要求1的组合物，还包含氨基酸。

8.权利要求7的组合物，其中氨基酸是非必需氨基酸。

9.权利要求1的组合物，还包含还原剂。

10.权利要求9的组合物，其中还原剂是β-巯基乙醇。

11.权利要求1的组合物，还包含抗生素和/或杀真菌剂。

12.权利要求1的组合物，还包含丙酮酸盐。

13.权利要求12的组合物，其中丙酮酸盐是丙酮酸钠或丙酮酸钾。

14.权利要求1的组合物，还包含LIF。

15.权利要求1的组合物，还包含L-谷氨酰胺。

16.组合物，包含补加有非必需氨基酸、抗氧化剂、还原剂、生长因子、丙酮酸盐和肌球蛋白II抑制剂的基础培养基。

17.权利要求16的组合物，其中基础培养基是DMEM。

18.试剂盒，包含聚-D-赖氨酸、确定成分培养基和肌球蛋白II抑制剂。

19.权利要求18的试剂盒，还包含组织培养基底。

20.权利要求18的试剂盒，还包含含有生长因子的添加物。

21.权利要求18的试剂盒，其中确定成分培养基是无血清的并且包含重组bFGF、重组TGFβ，具有大约330-350mOsm的容量克分子渗透压浓度和7.25至7.45的pH。

22.权利要求18的试剂盒，其中肌球蛋白II抑制剂是肌球蛋白II马达活性抑制剂或其类似物。

23.培养干细胞的方法，包括：

将干细胞悬浮于包含肌球蛋白II抑制剂的培养基中；和

在聚-D-赖氨酸包被的组织培养基底存在下培养干细胞。

24.权利要求23的方法，其中培养基是确定成分培养基。

25.权利要求24的方法，其中确定成分培养基是无血清的。

26.权利要求25的方法，还包含重组bFGF、重组TGFβ、大约330-350mOsm的容量克分子渗透压浓度和7.25至7.45的pH。

27.干细胞培养物，包含在权利要求1的组合物中的干细胞。

28.权利要求23的干细胞培养物，其中干细胞在聚-D-赖氨酸存在下培养。

29.权利要求27的干细胞培养物，其中肌球蛋白II抑制剂是肌球蛋白II马达活性抑制剂或其类似物。

30.试剂盒，包含权利要求1或16的组合物。

31.试剂盒，包含区室化的肌球蛋白II抑制剂，所述区室化的肌球蛋白II抑制剂将添加至基础培养基或者确定成分培养基中。

32.培养干细胞的方法，包括：

在饲养层缺乏情况下将干细胞与权利要求1或16的组合物接触，其中干细胞生长和增殖。

33.组合物，包含含有重组bFGF、重组TGFβ的确定成分培养基，其中组合物是无血清的并且包含肌球蛋白II抑制剂。

34.权利要求33的组合物，其中确定成分培养基具有大约330-350mOsm的容量克分子渗透压浓度和7.25至7.45的pH。

35.在包含聚-D-赖氨酸基底的无动物培养基中和促进干细胞增殖和生长的培养基中培养干细胞的方法，其中培养基包含无动物成分和肌球蛋白II抑制剂、ROCK抑制剂或其组合。