[发明专利]工程再造mRNA一级结构以增强蛋白质产生

权利要求书

1.一种提高全长蛋白质表达效率的方法，其包括：

a)提供多核苷酸，其包含：

i)所述蛋白质的编码序列；

ii)一级起始密码子，其位于所述编码序列上游；和

iii)一个或多个二级起始密码子，其位于所述编码序列内；和

b)使一个或多个二级起始密码子突变，其中所述突变导致在所述一个或多个二级起始密码子处蛋白质合成的起始发生减少，所述蛋白质合成的起始发生减少导致偏离所述一级起始密码子的核糖体转移减少，

从而提高全长蛋白质表达效率。

2.根据权利要求1所述的方法，其中使所述一个或多个二级起始密码子突变包括使一个或多个核苷酸突变，使得氨基酸序列保持不变。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述一个或多个二级起始密码子与所述编码序列位于相同阅读框内。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述一个或多个二级起始密码子与所述编码序列不同框。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述一个或多个二级起始密码子位于核糖体募集位点上游或下游一个或多个核苷酸的位置。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述核糖体募集位点包括帽或IRES。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述一个或多个二级起始密码子选自AUG、ACG、GUG、UUG、CUG、AUA、AUC和AUU。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述编码序列内超过一个二级起始密码子被突变。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述编码序列内所有二级起始密码子被突变。

10.根据权利要求1所述的方法，其中使所述一个或多个二级起始密码子突变包括使侧翼核苷酸突变成较不利的核苷酸背景。

11.根据权利要求1所述的方法，其中使所述一个或多个二级起始密码子突变并不引入新的起始密码子。

12.根据权利要求1所述的方法，其中使所述一个或多个二级起始密码子突变并不改变被突变密码子的使用偏好。

13.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括减少除该全长被编码蛋白质以外的截短蛋白质、多肽或肽的产生。

14.根据权利要求1所述的方法，其中使一个或多个二级起始密码子突变并不引入miRNA种子序列、剪接供体位点、剪接受体位点或mRNA去稳定元件。

15.一种提高全长蛋白质表达效率的方法，其包括：

a)提供多核苷酸序列，其包含所述蛋白质的编码序列，和位于所述编码序列内的一个或多个miRNA结合位点；和

b)使所述一个或多个miRNA结合位点突变，其中所述突变导致在所述一个或多个miRNA结合位点处miRNA结合发生减少，所述miRNA结合发生减少导致由miRNA介导的蛋白质翻译的下调作用发生减少，从而提高全长蛋白质表达效率。

16.根据权利要求15所述的方法，其中使所述一个或多个miRNA结合位点突变包括使一个或多个核苷酸突变，使得氨基酸序列保持不变。

17.根据权利要求15所述的方法，其中使所述一个或多个miRNA结合位点突变包括使miRNA种子序列中的一个或多个核苷酸突变。

18.根据权利要求15所述的方法，其中使所述一个或多个miRNA结合位点突变包括使一个或多个核苷酸突变，使得起始密码子不被引入所述多核苷酸序列中。

19.根据权利要求15所述的方法，其中使所述一个或多个miRNA结合位点突变包括使一个或多个核苷酸突变，使得稀有密码子不被引入所述多核苷酸序列中。

20.根据权利要求15所述的方法，其中使所述一个或多个miRNA结合位点突变包括使一个或多个核苷酸突变，使得额外的miRNA种子序列不被引入所述多核苷酸序列中。

21.根据权利要求15所述的方法，其中所述一个或多个miRNA结合位点位于所述编码序列内。