[发明专利]用于检测基孔肯雅病毒的探针和引物

权利要求书

1.有SEQ ID No.1和2的探针。

2.根据权利要求1所述的探针，其中所述探针用于检测基孔肯雅病毒。

3.有SEQ ID No.1和2在5′末端或3′末端或两处与可检测标记结合的探针。

4.根据权利要求3所述的探针，其中所述探针在5′末端与荧光团结合、而在3′末端与猝灭剂结合。

5.根据权利要求4所述的探针，其中所述荧光团选自包含荧光素及荧光素衍生物VIC、JOE、5-(2′-氨乙基)氨基萘-1-磺酸、香豆素及香豆素衍生物、荧光黄、德克萨斯红、四甲基罗丹明、6-羧基荧光素(FAM)、四氯-6-羧基荧光素、5-羧基罗丹明和花青染料的组。

6.根据权利要求4所述的探针，其中所述猝灭剂选自包含四甲基罗丹明、4′-(4-二甲基氨基苯偶氮基)苯甲酸、4-二甲基氨基苯偶氮苯基-4′-马来酰亚胺、四甲基罗丹明、羧基四甲基罗丹明及黑洞猝灭剂染料的组。

7.根据权利要求5和6所述的探针，其中优选的荧光团是5′末端的6-羧基荧光素[FAM]，而优选的猝灭剂是3′末端的四甲基罗丹明[TAMRA]。

8.引物SEQ ID No.3、4、5和6。

9.根据权利要求8所述的引物，其中有SEQ ID No.3和4的引物是正义引物，有SEQ ID No.5和6的引物是反义引物。

10.根据权利要求9所述的引物，其中所述有SEQ ID No.3和5的引物对应于探针SEQ ID No.1，所述有SEQ ID No.4和6的引物对应于探针SEQ ID No.2。

11.根据权利要求9所述的引物，其中所述有SEQ ID No.1和2的探针可选地在5′末端或3′末端或两处与可检测标记结合。

12.一种检测基孔肯雅的PCR反应混合物，所述混合物包含待检测的样品、核酸扩增试剂、选自包括SEQ ID No.1和2的组中的探针、以及选自包括SEQ ID No.3、4、5和6的组中的相应引物。

13.根据权利要求12所述的反应混合物，其中所述有SEQ ID No.3和5的引物对应于探针SEQ ID No.1，所述有SEQ ID No.4和6的引物对应于探针SEQ ID No.2。

14.根据权利要求13所述的反应混合物，其中所述有SEQ ID No.1和2的探针在5′末端或3′末端或两处与可检测标记可选地结合。

15.根据权利要求12所述的反应混合物，其中所述样品选自包括血液、血清和血浆的组。

16.一种检测与可选地量化基孔肯雅感染的方法，所述方法包含以下步骤：

(a)形成反应混合物，所述反应混合物包含待检测的样品、核酸扩增试剂、选自包括SEQ ID No.1和2的组中的探针、以及选自包括SEQ ID No.3、4、5和6的组中的相应引物；

(b)使反应混合物进行PCR以获得目标序列的拷贝，然后通过测量荧光信号的增加来检测基孔肯雅感染；以及

(c)可选地，由检测信号构建标准曲线以获得用于量化所述基孔肯雅感染的拷贝数。

17.根据权利要求16所述的方法，其中有SEQ ID No.3和4的引物是正义引物，有SEQ ID No.5和6的引物是反义引物，并且其中所述样品选自包含血液、血清和血浆的组。

18.根据权利要求17所述的方法，其中所述有SEQ ID No.3和5的引物对应于探针SEQ ID No.1，所述有SEQ ID No.4和6的引物对应于探针SEQ ID No.2。

19.根据权利要求16所述的方法，其中所述有SEQ ID No.1和2探针在5′末端或3′末端或两处与可检测标记结合，其中所述荧光信号由在5′末端具有荧光团和在3′末端具有猝灭剂的探针产生。