[发明专利]用于测定神经毒素多肽的量及其催化活性和蛋白酶解活性的手段和方法

权利要求书

1.一种在含有已加工好的神经毒素多肽和部分加工和/或未加工的神经毒素多肽的溶液中确定加工好的神经毒素多肽量的方法，包括以下步骤：

a)使所述溶液的第一部分与第一捕获抗体接触，从而形成第一抗体复合物，其中所述第一捕获抗体特异性结合加工好的、部分加工和未加工的神经毒素多肽的轻链，其中所述接触在允许所述抗体结合到所述神经毒素上的条件下进行，

b)使第一抗体复合物与检测抗体接触，从而形成第一检测复合物，其中所述检测抗体特异性结合步骤a)形成的抗体复合物中的所述加工好的、未加工的和部分加工的神经毒素多肽的重链，

c)使所述溶液的第二部分与第二捕获抗体接触，从而形成第二抗体复合物，其中所述第二捕获抗体特异性结合所述部分加工的或未加工的神经毒素多肽的接头，其中所述接触在允许所述抗体结合到所述部分加工的或未加工的神经毒素多肽上的条件下进行，

d)使第二抗体复合物与检测抗体接触，从而形成第二检测复合物，

e)测定步骤b)和d)中形成的第一和第二检测复合物的量。

f)根据步骤e)中测定的第一和第二检测复合物的量，计算成熟神经毒素多肽的量。

2.一种在含有已加工好的神经毒素多肽和部分加工和/或未加工的神经毒素多肽的溶液中测定加工好的(活性)神经毒素多肽量的方法，包括以下步骤：

a)使所述溶液的第一部分与第一捕获抗体接触，从而形成第一抗体复合物，其中所述第一捕获抗体特异性结合成熟神经毒素多肽、部分加工的和未加工的神经毒素多肽的重链，其中所述接触在允许所述抗体结合到所述成熟神经毒素、部分加工的和未加工的神经毒素多肽上的条件下进行，

b)使第一抗体复合物与检测抗体接触，从而形成第一检测复合物，其中所述检测抗体特异性结合步骤a)形成的抗体复合物中的所述成熟神经毒素、部分加工的和未加工的神经毒素多肽的轻链，

c)使所述溶液的第二部分与第二捕获抗体接触，从而形成第二抗体复合物，其中所述第二捕获抗体特异性结合所述部分加工的和未加工的神经毒素多肽的接头，其中所述接触在允许所述抗体结合到所述部分加工的和未加工的神经毒素多肽上的条件下进行，

d)使第二抗体复合物与检测抗体接触，从而形成第二检测复合物，

e)测定步骤b)和d)中形成的第一和第二检测复合物的量。

f)根据步骤e)中测定的第一和第二检测复合物的量，计算成熟神经毒素多肽的量。

3.权利要求1或2的方法，其中所述第一捕获抗体是固定化的。

4.权利要求1至3的任何一项中的方法，其中所述第二捕获抗体是固定化的。

5.权利要求1至4的任何一项中的方法，其中步骤f)中的计算包括从所测定的第一检测复合物的量中减去所测定的第二检测复合物的量。

6.权利要求1至5的任何一项中的方法，其中所述第二捕获抗体特异地结合具有SEQ ID NO：1至16中任何一个所示的氨基酸序列的肽表位。

7.权利要求1至6的任何一项中的方法，其中所述神经毒素多肽选自：

a)SEQ ID NO：17至24中任何一个所示的神经毒素多肽；以及

b)具有与a)中的神经毒素多肽的氨基酸序列至少40％相同的氨基酸序列的神经毒素多肽。

8.权利要求1至7的任何一项中的方法，其中所述方法还包括测定神经毒素多肽的结合活性。

9.权利要求8的方法，包括以下步骤：

a)使含有神经毒素多肽的溶液的一部分与标记的肽接触，从而形成复合物，以及

b)根据标记物，测定步骤a)中形成的所述复合物，其中，复合物的存在、缺乏或其量指示所述溶液中的神经毒素多肽的结合活性。

10.权利要求1至9的任何一项中的方法，其中所述方法还包括测定神经毒素多肽的蛋白酶解活性。