[发明专利]采用Axl作为上皮‑间质转化的生物标志物的方法

说明书

本发明涉及用于检测上皮-间质转化（EMT）（epithelial-to-mesenchymal transition）的发生的生物标志物以及诊断/预测方法。更具体而言，本发明涉及与Axl的表达和/或活性有关的诊断、预测和疗法。

背景技术

Axl为受体酪氨酸激酶亚家族的成员。尽管与其他受体酪氨酸激酶相似，但是Axl蛋白显示出胞外区的独特结构，该结构中IgL和FNIII重复结构并列，并且还具有含胞内结构域的胞内区（其一部分为激酶结构域）。Axl通过结合生长因子（如维生素K依赖性蛋白生长停滞特异性基因6（Gas6））将信号从细胞外基质传导入细胞质。Axl的胞外结构域可被切割，并且可以释放65kDa的可溶性胞外结构域。切割增强了受体周转并生成部分激活的激酶（O'Bryan JP等（1995）J Biol Chem.270（2）:551-557）。然而，被切割的结构域的功能是未知的。

在专利文献WO 03/068983中描述了与人Axl基因和基因产物有关的结构信息。下列专利文献也涉及Axl或其他受体酪氨酸激酶：US 5,468,634；US 6,087,144；US 5,538,861；US 5,968,508；US6,211,142；US 6,235,769；WO 99/49894；WO 00/76309；WO 01/16181和WO 01/32926。

Axl参与细胞增殖的刺激。具体而言，Axl为慢性粒细胞白血病相关致癌基因，其与结肠癌和黑色素瘤也有关。Axl邻近位于19q13.1-q13.2的bcl3致癌基因。Axl基因在脊椎动物物种之间是进化保守的，并且在间质细胞的发育过程中表达。

与Gas6配体互相作用时，Axl开始自磷酸化，并且发生级联信号转导事件。已知PI3K、AKT、src、Bad、14-3-3、PLC、ERK、S6K （有丝分裂原调节激酶）和STAT均参与该级联反应。Gas6具有富含y-羧基谷氨酸的区域（GLA结构域），其允许Ca++依赖性结合至膜磷脂。Gas6是弱的有丝分裂原并且在NIH3T3成纤维细胞受到TNF诱导的细胞毒性或去除生长因子的压力时具有抗凋亡的效应。在NIH3T3中，Gas6与Axl的结合可以激活PI3K、AKT、src和Bad。

已有研究表明Axl在肿瘤形成中起了很多不同的作用。Axl在包括内皮细胞迁移、增殖和管生成在内的血管生成行为中是关键的调节子。人乳腺癌细胞在体内形成肿瘤也需要Axl，表明Axl调节的是对新生血管和肿瘤发生而言关键的过程（Holland S.等，Cancer Res 2005；65（20）,2005年10月15日）。

Axl受体酪氨酸激酶的活性与肿瘤转移正相关。更具体而言，已有研究表明Axl能增强Axl介导的侵染所需的MMP-9的表达。Axl通过NF-Bκ和Brg-1的活化诱导MMP-9的活性从而促进细胞侵染（Tai,K-Y等，Oncogene（2008）,27,4044-4055）。

Axl在人胶质瘤细胞中过表达，并且可以用于预测患有多形性成胶质细胞瘤（GBM）患者的不良预后（Vajkoczy P.等，PNAS,April 11,2006,vol 103,no.15,5799-5804；Hutterer M.等，Clinical Cancer Res 2008;14（1）Jan1,2008）。与最小侵染性肺癌细胞株相比，Axl还在高侵染性肺癌细胞株中相对地过表达（Shieh,Y-S等，Neoplasia,vol 7,no.12,Dec 2005,1058-1064）。因此认为Axl在肿瘤侵染和发展中起到极为重要的作用。

类似地，Axl在高侵染性乳腺癌细胞中过表达，而在低侵染性乳腺癌细胞中没有过表达。更具体而言，抑制Axl的信号传导（通过显性失活的Axl突变体、针对Axl的胞外结构域的抗体、或短发夹RNA基因抑制Axl）降低了高侵染性乳腺癌细胞的迁移和侵染性。小分子Axl抑制剂干扰了乳腺癌细胞的迁移和侵染。因此，Axl被认为是控制乳腺癌细胞迁移/侵染的信号传导网络中的关键因素（Zhang,Y-X等，Cancer Res 2008;68（6）,March 15,2008）。