[发明专利]用于诊断及临床应用的癌胚胎抗原/未成熟层粘连蛋白受体抗体

说明书

本申请要求于2009年3月26日提交的申请号为61/163，810的美国临时申请的权益，该公开以其整体通过引用并入本文。

发明领域

本发明大体上涉及癌胚胎抗原/未成熟层粘连蛋白受体蛋白(OFA/iLRP)。更具体来说，本发明提供可用于检测和治疗OFA/iLRP相关疾病的抗体。

发明背景

癌胚胎抗原/未成熟层粘连蛋白受体蛋白(OFA/iLRP)的初始鉴定由研究癌胚胎抗原或层粘连蛋白受体的三个独立的组完成[1-3]。OFA/iLRP是高度保守的蛋白质，其在一系列不同癌症中过表达并具有作为核糖体蛋白p40的双重功能[4-27]。OFA/iLRP蛋白质包含295个氨基酸的单一多肽链并具有约37-44kDa的分子量。OFA/iLRP的结构最近被阐明到的水平[28]。层粘连蛋白受体(LPR)的成熟形式似乎为乙酰化的OFA/iLRP二聚体，其具有67kDa的分子量。结构显示OFA/iLRP的第112到140位氨基酸间的区域涉及形成LPR的OFA/iLRP二聚化[28]。尽管67kDa的LRP出现在许多正常细胞和肿瘤细胞中，OFA/iLRP似乎优选由胎儿和肿瘤细胞表达。因此，该表达模式使OFA/iLRP成为致敏免疫系统来治疗癌症和其他疾病的可能的候选蛋白质。OFA/iLRP的特异性抗体还可用于检测、诊断和治疗已知与OFA/iLRP错误表达相关的疾病。

关于OFA/iLRP抗体的初始工作分为两个单独的领域，癌胚胎抗原方面或层粘连蛋白受体方面。胚胎/胎儿抗原和层粘连蛋白受体的针对OFA/iLRP的单克隆抗体的初始报道发现于同一年[29，30]。针对胚胎或胎儿抗原所开发的抗体在变性条件下与44kDa的蛋白质反应[30]。以前开发的针对层粘连蛋白受体的抗体依据抗体结合位置具有不同的生物学活性[29]。单克隆IgM抗体识别一个具有阻断层粘连蛋白结合的生物学活性的区域。所述单克隆IgM抗体识别的表位是TEDWSAQPATEDWSA[26]。对44kDa OFA的研究表明，IgM单克隆抗体(MAb 115)可用于蛋白质印迹、流式细胞术并可能用于致癌性测试[31]。但是，由于该抗体不是专门针对OFA|OFA二聚化区域设计的，其与OFA/iLRP和LRP都反应[31]。该单克隆抗体用于OFA/iLRP或LRP的免疫组织化学及蛋白质纯化[12，32]。由检测67kDa层粘连蛋白受体并显示层粘连蛋白受体在乳腺癌中表达提高的肽开发了不同的抗体[5，33]。在寻找自身免疫抗体时，若干发表的文章描述了OFA/iLRP抗体的用途[6，9，10，16，19，20，25，27，34-36]。

由于OFA/iLRP与一系列不同的疾病相关，有需要开发诊断及临床抗体应用。至今，仅存在少数利用肽开发靶向抗体的尝试，并且其局限于一篇发表的报道中[5]。发表的报道中使用的区域产生报道为与OFA/iLRP和层粘连蛋白受体都反应的抗体[5，25]。因此，需要开发可单独地或联合其它抗体使用的OFA/iLRP特异性抗体来开发一系列不同的临床、诊断和/或兽医学应用。抗体的成对开发(一种可识别OFA/iLRP，一种可识别OFA/iLRP和LRP)使得可以开发若干测试，其可用于在所有物种中(由于蛋白的保守性质)治疗、诊断OFA/iLRP疾病或充当OFA/iLRP疾病的试剂。

发明概述

本发明一方面提供分离的抗体，其特异性结合癌胚胎抗原/层粘连蛋白受体蛋白(OFA/iLRP)的区域，其中所述区域是免疫原性的。在一个实施方案中，OFA/iLRP的免疫原性区域包括但不限于多肽序列(a)FFREPRLLWTDPR、(b)VTDPRADHQPLTE、(C)YRDPEEIEKEEQ或(d)FPTEDWSAQPATED。在另一个实施方案中，本发明的分离的抗体为多克隆或单克隆抗体，其包括但不限于，单克隆抗体2C6或3G7。在另外一个实施方案中，所述免疫原性区域位于OFA/iLRP的二聚化区域。

通过针对OFA/iLRP的免疫原性区域免疫产生本发明的抗体。所述抗体能够识别全长OFA/iLRP蛋白和用于产生本发明的抗体的OFA/iLRP的免疫原性区域。在一个实施方案中，抗体是OFA/iLRP特异性的。在另一个实施方案中，抗体识别OFA/iLRP和成熟LRP。

本发明的抗体可用于不同的检测OFA/iLRP相关蛋白质或癌症的方法中。

在一个实施方案中，抗体用于检测样品中OFA/iLRP的方法。该方法包括：