[发明专利]从hPS细胞来源的定形内胚层诱导获得特定内胚层

权利要求书

1.特定浓度的FGF2用于控制来源于hPS细胞的定形内胚层细胞向特定内胚层细胞的分化的用途。

2.前述权利要求中任一项的用途，其中所述hPS细胞是hBS细胞。

3.权利要求1的用途，其中培养基中FGF2的浓度小于或等于500ng/ml。

4.前述权利要求中任一项的用途，其中FGF2的浓度的范围为约0.1至约16ng/ml并且所述特定内胚层细胞是肝内胚层细胞。

5.前述权利要求中任一项的用途，其中FGF2的浓度的范围为4ng/ml至6ng/ml，例如5ng/ml，并且所述特定内胚层细胞是肝内胚层细胞。

6.权利要求4-5的用途，其中所述肝内胚层细胞表达AFP和一种或多种下列标记：FOXA2、白蛋白(ALB)、HNF4A、HNF6(ONECUT)、Prox1、CK17、CK19、Hex、FABp1、AAT、Cyp7A1、Cyp3A4、Cyp2B6、Cyp3A7。

7.权利要求4-5的用途，其中所述肝内胚层细胞表达下列标记：ALB、HNF6和HNF4A。

8.权利要求4-7中任一项的用途，其中所述肝内胚层细胞表达两种或更多种下列标记：AFP、HNF4A、Prox1。

9.权利要求1-3中任一项的用途，其中FGF2的浓度的范围为约16至约150ng/ml，例如64ng/ml，并且所述特定内胚层细胞是胰内胚层细胞。

10.权利要求9的用途，其中胰内胚层细胞表达PDX1和一种或多种下列标记：NGN3、CPA1、SOX9、HNF6、HNF1 b、E-钙黏着蛋白、MNX1、PTF1 A和NKX6-1。

11.权利要求9或10的用途，其中所述胰内胚层细胞表达PDX1和NKX6-1。

12.权利要求9-11中任一项的用途，其中所述胰内胚层细胞表达下列标记：SOX9、ONECUT1、FOXA2。

13.权利要求9-12中任一项的用途，其中所述胰内胚层细胞表达至少一种选自胰岛素、胰高血糖素、促生长素抑制素、胰多肽和ghrelin的胰激素。

14.权利要求1-3中任一项的用途，其中FGF2的浓度的范围为约150至约500ng/ml并且所述特定内胚层细胞是肠和/或肺内胚层细胞。

15.权利要求14的用途，其中所述特定内胚层细胞是表达CDX2和一种或多种下列标记的肠细胞：CDX1、FOXA2、PITX2、FABp2、TCF4、绒毛蛋白和MNX1。

16.权利要求14或15的用途，其中所述特定内胚层细胞是表达CDX1、CDX2和MNX1的肠内胚层细胞。

17.权利要求14的用途，其中所述特定内胚层细胞是表达一种或多种下列标记的肺内胚层细胞：NKX2-1、SHH、PTCH1和SPRY2。

18.前述权利要求中任一项的用途，其中所述分化包括在含有FGF2的培养基中对定形内胚层细胞的孵育，所述FGF2的浓度适于分化成合乎需要的分别如权利要求4、9和14所限定的内胚层命运。

19.用于制备肝内胚层细胞的方法，所述方法包括将定形内胚层细胞在含有0.1至16ng/ml FGF2的培养基中孵育约2至20天，例如6至8天或9至12天。

20.通过权利要求19中限定的方法可获得的肝内胚层细胞。

21.具有如权利要求6-8中任一项所限定的特征的权利要求18的肝内胚层细胞。

22.用于制备胰内胚层细胞的方法，所述方法包括将定形内胚层细胞在含有16至150ng/ml FGF2的培养基中孵育约2至20天，例如6至8天。

23.通过权利要求22中限定的方法可获得的胰内胚层细胞.

24.具有如权利要求10-13中任一项所限定的特征的权利要求21的胰内胚层细胞。