[发明专利]复杂核酸的扩增

权利要求书

1.一种对样品中一种或多种待扩增的复杂模板核酸进行定量和定性分析的方法，所述方法包括以下步骤：

a)提供反应混合物，其包含

-所述待扩增的模板核酸；

-指定量的至少一种对照核酸，其中所述对照核酸与所述模板核酸具有小于50％的序列相同性，并且其中所述对照核酸具有至少一个已知的序列片段；

-用于扩增所述模板核酸的引物；

-用于扩增所述对照核酸的引物；

-适于核酸扩增的酶和试剂；

b)对所述模板核酸和所述对照核酸进行共同扩增，其中所述共同扩增等温进行，其中所述共同扩增包括链置换反应，并且其中所述模板和对照核酸通过所述扩增基本上完全扩增，以允许对照核酸和模板核酸竞争任意所述引物、酶和试剂；

c)对所述扩增的对照核酸进行定量，以评估所述复杂模板核酸的起始量或质量，其中所述定量在步骤b)的所述共同扩增结束后进行，其中，通过使用与所述至少一个已知序列片段杂交的序列特异性引物进行扩增的方式对所述扩增的对照核酸进行定量；和

d)基于步骤c)对再次扩增的对照核酸进行定量的结果，确定进行步骤b)的共同扩增之前存在的所述复杂模板核酸的数量或质量。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，另外在所述共同扩增结束后对核酸总量进行定量。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述扩增的对照核酸的数量和总核酸的数量与所述复杂模板核酸的完全扩增相关。

4.根据权利要求1－3中任一项所述的方法，其特征在于，所述对照核酸为线性核酸。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述线性对照核酸包含大于800个核苷酸。

6.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其特征在于，所述对照核酸为环状核酸。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其特征在于，所述一种或多种复杂模板核酸包含大于10,000个核苷酸。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其特征在于，所述一种或多种复杂模板核酸选自DNA和RNA。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其特征在于，所述复杂模板核酸包含一个或多个基因组和/或一个或多个转录物组和/或一个或多个种亚硫酸氢盐组。

10.权利要求1至9中任一项所述的方法在标准化全基因组和/或全转录物组和/或全亚硫酸氢盐组扩增中的用途。